神經(jīng)再生素促海馬神經(jīng)元生長作用及機制初探.pdf

1、目的：觀察神經(jīng)再生素(NerveRegenerationFactor，NRF)對體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元生長的促進作用，初步探討NRF促神經(jīng)生長的作用機制。 方法： 1、以體外原代培養(yǎng)的胎鼠海馬神經(jīng)元為研究模型，通過相差顯微鏡采用Scion軟件，測量不同濃度NRF(0.25，0.5，1.Oμg/m1)作用不同時間(6h，12h，24h)對海馬神經(jīng)元神經(jīng)突起生長的影響。 2、胎鼠海馬神經(jīng)元加藥6h后，分別提取對照組(

2、DMEM基礎培養(yǎng)基)和加藥組(1.0p.g/mlNRF)細胞總RNA，經(jīng)逆轉錄生成生物素標記的cRNA，純化和片段化處理后與GeneChip~RatGenome2302.0Array芯片(Affymetrix公司)雜交，洗脫后芯片掃描，數(shù)據(jù)處理，觀察NRF對海馬神經(jīng)元基因表達的影響。 3、通過實時熒光定量PCR觀察NRF不同濃度(0.25，0.5，1.01ag/m1)及不同作用時間(6h，12h，24h)對海馬神經(jīng)元生長相關蛋白

3、.43(GrowthassociatedProtein-43)基因表達的影響；以goatanti.GAP-43polyclonalantibody為一抗，donkeyanti-goatIgG為二抗，采用免疫熒光細胞化學法和Westernblot觀察，不同濃度NRF(0.25，0.5，1.Ogg/m1)加藥24h后，對海馬神經(jīng)元GAP-43表達的影響。 結果： 1、Scion軟件測量和統(tǒng)計結果顯示，NRF具有促進體外培養(yǎng)的

4、胎鼠海馬神經(jīng)元突起生長的作用，在所觀察的劑量范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，作用逐步增強，至1μg/ml達峰值，隨著加藥時間的延長，作用逐步增加，至24h時，作用最明顯。 2、Aflymetrix大鼠全基因組芯片分析結果表明，檢測的15866個基因中，248個基因上調(diào)，316個基因下調(diào)，其中25個上調(diào)和47個下調(diào)基因有顯著性差異表達。這些差異表達的基因，有G蛋白偶聯(lián)受體、信號轉導分子、細胞組分、生物過程生長代謝調(diào)控因子、免疫蛋白、酶

5、和凋亡的調(diào)控因子等。 3、實時熒光定量PCR結果提示，NRF能使體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元GAP-43基因表達上調(diào)，1txg/mlNRF加藥后6h開始與陰性對照組差異有統(tǒng)計學意義；免疫熒光細胞化學和Westernblot結果提示，NRF能使體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元GAP-43蛋白表達上調(diào)，NRF濃度為1.01xg/ml時作用最強。 結論 1、NRF具有促進體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元神經(jīng)突起生長的作用，且這種作用呈現(xiàn)劑量相關和時