草魚白細胞介素-4 基因(CiIL-4)的分子鑒定和功能分析.pdf

1、白細胞介素-4（Interleukin-4，IL-4）是一種擁有多種生物活性的因子，在免疫系統(tǒng)中，IL-4作為 Th2免疫反應過程中的關鍵性的細胞因子發(fā)揮著重要的作用。然而，在硬骨魚類中關于 IL-4功能的研究一直很少報道。在這項研究中，我們克隆到了草魚（Ctenopharyngodon idellus）IL-4/13B的基因序列，并命名為 CiIL-4/13B?？寺〉降腃iIL-4/13B基因序列全長包含464個核苷酸殘基（nucle

2、otides，nt），其中包括一個開放閱讀框（open reading frame，ORF），這個開放閱讀框由408個氨基酸殘基組成，翻譯后的多肽分子量大小為15.5 kDa。多重序列比對結果顯示CiIL-4/13B與鯉魚（Cyprinus carpio）IL-4/13B的相似性最高，為49％。在所有待檢測的組織和外周血淋巴細胞中都能檢測到CiIL-4/13B mRNA的表達，其中外周血淋巴細胞和腮中的mRNA含量最高。在嗜水氣單胞菌（

3、Aeromonas hydrophila）感染后的草魚中所有組織和外周血淋巴細胞中 CiIL-4/13B mRNA表達量均顯著上升。利用原核表達和蛋白純化等手段成功制備了草魚的去掉信號肽的成熟的IL-4/13B蛋白，并利用得到的重組蛋白制備了多克隆抗體。蛋白免疫印跡結果分析顯示，草魚血清中的天然 IL-4/13B蛋白存在糖基化，并且在蛋白水平上證明嗜水氣單胞菌感染的草魚血清中 IL-4/13B蛋白的表達量在實驗期間是越來越高的。體外實驗

4、中，重組草魚 IL-4/13B蛋白（rCiIL-4/13B）能夠顯著抑制炎性細胞因子的釋放、單核/巨噬細胞（MO/MФ）吞噬的能力。此外，動物保護試驗的結果顯示，適量的rCiIL-4/13B蛋白可以顯著提高嗜水氣單胞菌感染后的草魚存活率。同時，組織載菌量實驗結果顯示，rCiIL-4/13B蛋白可以減少草魚的肝、脾、腎和血組織中細菌的數(shù)量，進而改善整個受細菌感染的微環(huán)境。本實驗第一次揭示了魚類MO/MФ和 IL-4/13B之間的調(diào)控關系。