人阿爾茨海默氏病相關Aβ肽和家蠶抗菌肽moricin的原核表達及生化分析.pdf

1、生物活性多肽，也稱功能肽。迄今，在人體中已發(fā)現(xiàn)了100多種生物活性多肽，這些多肽具有傳遞生理信息和調(diào)節(jié)生理功能的作用，對于人體的神經(jīng)、消化、生殖、生長、運動、代謝、循環(huán)等系統(tǒng)的正常生理活動的維持非常重要。幾乎所有疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療和康復都與多肽有關系。為了開展功能性多肽的研究，建立一種大量表達、快速分離多肽的方法十分必要。為此，我們采取融合表達的策略，在大腸桿菌中分別表達純化了人阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease

2、，AD)相關淀粉樣肽（amyloid beta peptide，Aβ）及家蠶抗菌肽moricin，并對獲得的Aβ肽和家蠶抗菌肽moricin分別進行了生化分析和抗菌測定。 Aβ肽的異常積聚是AD的主要病理特征之一。目前，已在AD病人腦內(nèi)檢測到一系列不同長度的Aβ肽，其長度35-46個殘基不等。我們將Aβ基因融合于Pet-32M載體中，在大腸桿菌中表達一系列包含長度不等Aβ肽的融合蛋白。融合蛋白經(jīng)Ni-NTA柱純化后，再經(jīng)過凝血酶

3、（thrombin）酶切獲得不同長度的小肽：Aβ1-46，Aβ1-44，Aβ1-42，Aβ1-40，Aβ1-35，Aβ1-32，Aβ1-28和Aβ29-46等。應用硫磺素T（Thioflavin T，ThT）熒光檢測方法比較分析了它們在體外的積聚能力。另一方面，我們構建了Aβ-GFP的表達載體，在大腸桿菌中表達。由于Aβ的積聚會影響GFP的熒光發(fā)生，通過觀察GFP熒光的強弱可以比較Aβ在大腸桿菌細胞內(nèi)的積聚情況。實驗結果顯示Aβ1-46

4、，Aβ1-44和Aβ1-42積聚較快，基本沒有延滯期；Aβ1-40和Aβ1-35雖然也能夠積聚，但速度較慢，存在較長的延滯期；而 Aβ1-32，Aβ1-28和Aβ29-46沒有檢測到積聚現(xiàn)象。這些結果表明，C-端氨基酸殘基的存在有利于寡聚體積聚核的形成，加速了Aβ肽的積聚過程；淀粉樣肽前體APP在細胞膜內(nèi)的酶切位點影響產(chǎn)物Aβ肽的積聚能力，這也是Aβ1-42的積聚速率和細胞毒性大于Aβ1-40的原因之一。 Moricin是家蠶中