檢測(cè)傳染性支氣管炎病毒抗體的血凝抑制試驗(yàn)抗原及IB-ND-IBD-EDS-AI五聯(lián)滅活疫苗的研制.pdf

1、傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的急性、高度接觸性傳染病，給世界范圍內(nèi)養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。本研究制備了血凝抑制(HI)試驗(yàn)抗原，建立了檢測(cè)IBV抗體的HI試驗(yàn)方法；對(duì)分離的IBV流行毒株(LH株)進(jìn)行了全面鑒定，并研制了IB-新城疫(ND)-傳染性法氏囊病(IBD)-減蛋綜合癥(EDS)-禽流感(AI)五聯(lián)滅活疫苗。
　　 1檢測(cè)IBV抗體的HI試驗(yàn)抗原制備
　　 本研究比較了三種濃縮IBV

2、方法(超速離心法、PEG沉淀法和PEG透析法)和三種酶(A型產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)濾液、I型卵磷脂酶C和神經(jīng)氨酸酶)對(duì)制備HI試驗(yàn)抗原的影響。最后確定最佳方法為：將IBV(M41株)接種于10日齡SPF雞胚，37℃孵化36 h，收獲尿囊液經(jīng)4000 g離心30 min，將上清再次以25000 g離心70min。濃縮的病毒液加入終濃度為3U/mL的PLC1，37℃孵育2 h，制備的HI試驗(yàn)抗原具有較高的特異性，建立的HI試驗(yàn)方法可以用于檢測(cè)IB

3、V HI抗體。
　　 2 IB-ND-IBD-EDS-AI五聯(lián)滅活疫苗的研制
　　 本研究對(duì)IBV(LH株)種毒進(jìn)行了鑒定，將毒株在雞胚中連續(xù)傳10代，測(cè)得P1、P5和P10代的病毒含量都≥106.5 EID50/0.1 mL，說(shuō)明此毒株穩(wěn)定。IBV(LH株)種毒無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體和其他外源病毒污染。使用H120弱毒疫苗做基礎(chǔ)免疫，3周后再用本毒株所制滅活疫苗免疫，二免IBV HI抗體效價(jià)幾何平均值是首免HI抗體效價(jià)幾

4、何平均值的3倍以上，IBV(LH株)具有良好的免疫原性。
　　 用NDV(LaSota株)，IBV(LH株)，IBDV(NF8株)，EDSV(AV127株)和H9亞型AIV(F株)接種SPF雞胚或非免疫鴨胚，收獲病毒液，經(jīng)0.1％甲醛滅活后制得抗原，按照一定生產(chǎn)工藝方法乳化，制成IB-ND-IBD-EDS-AI五聯(lián)滅活疫苗。
　　 用五聯(lián)滅活疫苗免疫雞只，免疫3周后NDV HI抗體效價(jià)幾何平均值達(dá)到6.5log2，IBV