Melatonin對(duì)巨核細(xì)胞凋亡的影響及對(duì)鐵負(fù)荷過重?fù)p害的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：探討Mel對(duì)巨核細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制，并探討鐵負(fù)荷過重是否對(duì)巨核細(xì)胞有凋亡損害作用以及Mel是否具有抑制凋亡的保護(hù)作用。 方法：采用巨核細(xì)胞細(xì)胞株CHRF-288-11為研究對(duì)象。(1)通過去血清誘導(dǎo)凋亡，加或不加Mel共培養(yǎng)后，①進(jìn)行24、48、72小時(shí)細(xì)胞計(jì)數(shù)、臺(tái)盼蘭拒染法測(cè)細(xì)胞存活率及XTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；②用流式細(xì)胞儀分別以Annexin V、Caspase-3、JC-1三種方法測(cè)定各組細(xì)胞凋亡率；并與正

2、常組和TPO組比較；⑧檢測(cè)信號(hào)通路AKT、ERK1/2，了解其參與保護(hù)作用的機(jī)制。(2)通過臺(tái)盼蘭拒染法測(cè)活細(xì)胞比率和流式細(xì)胞儀法測(cè)定Annexin V、Caspase-3、JC-1，觀察FeCl3負(fù)荷過重對(duì)CHRF細(xì)胞的凋亡損害作用。(3)通過臺(tái)盼蘭拒染法測(cè)活細(xì)胞比率和流式細(xì)胞儀法測(cè)定Annexin V、Caspase-3、JC-1，觀察Mel是否能夠抑制鐵負(fù)荷過重導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：(1)Mel對(duì)巨核系細(xì)胞CHRF增殖和

3、凋亡的影響：①細(xì)胞計(jì)數(shù)：在觀察周期內(nèi)，隨著孵育時(shí)間的延長，正常培養(yǎng)組細(xì)胞增殖明顯，對(duì)照組細(xì)胞數(shù)量則明顯減少，48h、72h分別為(3.3±0.7)×105/mL、(4.4±0.4)×105/mL，僅為同期正常組細(xì)胞數(shù)的62.3％(P=0.001)和37.9％(P=0.000)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。加入濃度為20、50、100、200和500 nmol/L Mel后，在濃度＞50 nmol/L Mel組細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組有明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義。細(xì)胞存活率顯示，在濃度50 nmol/L以上Mel組細(xì)胞存活率明顯提高，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，濃度200nmol/L時(shí)保護(hù)作用最強(qiáng)，細(xì)胞存活率由(66.8±3.8)％升至(81.6±5.2)％(n=4，P＜0.001)。XTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況顯示：Mel在濃度＞100nmol/L作用48、72小時(shí)后，OD值較對(duì)照組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②抗凋亡作用：Mel 200 nmol/L作用72小時(shí)

5、后，CHRF細(xì)胞Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表達(dá)較對(duì)照組有明顯下降，分別由(42.9±5.8)％、(29.5±5.6)％、(47.7±3.4)％降至(31.7±6.8)％(P＜0.05)、(21.8±1.7)％(P＜0.05)和(37.2±6.4)％(P＜0.05)。其中，JC-1的表達(dá)與TPO組(20.7+5.2)％比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而Annexin V/PI、Caspase-3的表達(dá)

6、與TPO組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。③加入Mel后CHRF細(xì)胞的磷酸化AKT、ERK1/2水平明顯增高，分別由(5.9±0.1)％、(6.1±0.4)％升至(9.5±0.1)％(P＜0.05)、(9.3 ±0.5)％(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)鐵對(duì)CHRF細(xì)胞凋亡的影響：濃度0.3mmol/L FeCl3作用8小時(shí)后，CHRF細(xì)胞存活率下降，凋亡明顯，Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表

7、達(dá)與對(duì)照組比較，分別為(37.9±2.7)％vs(16.4±2.8)％、(26.5±4.5)％vs(6.4±1.5)％和(35.7±5.6)％vs(10.8±3.1)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)Mel 200nmol/L可以拮抗鐵毒性，減少細(xì)胞凋亡，Annexin V/PI、Caspase-3和JC-1的表達(dá)，分別由(37.9±2.7)％、(26.5±4.5）％、(35.7±5.6)％降為(26.9±2.2)％、(19.0±3.9)％、