低密度脂蛋白誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向平滑肌樣細(xì)胞分化的作用研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis，As)是許多心腦血管疾病發(fā)生的前期病理基礎(chǔ)。在高脂等因素所致的As發(fā)生過(guò)程中，平滑肌細(xì)胞增生并合成細(xì)胞外基質(zhì)是其重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，病變中的平滑肌細(xì)胞來(lái)源于病變部位的動(dòng)脈中膜。然而最近研究結(jié)果表明，病灶部位的平滑肌細(xì)胞并非完全來(lái)自于中膜，骨髓來(lái)源的細(xì)胞在一定的情況下可以定向分化為平滑肌細(xì)胞參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。 目的：探討低密度脂蛋白(low density lipo

2、protein，LDL)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSC)向平滑肌樣細(xì)胞分化及 myocardin在其分化過(guò)程中的作用。 方法：用差異貼壁法分離純化原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，在不同濃度血清誘導(dǎo)BMSC分化條件下加以LDL刺激，檢測(cè)BMSC分化過(guò)程中myocardin及平滑肌細(xì)胞表面標(biāo)志平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，平滑肌肌球蛋白重鏈(smo

3、oth muscle myosin heavy chain，SM-MHC)以及SM-22α的表達(dá)。細(xì)胞分為: ①常規(guī)培養(yǎng)組(含低糖-DMEM培養(yǎng)基，10％胎牛血清，3％谷氨酰胺)，②常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組(25mg/L)，③20％FBS培養(yǎng)組，④20％FBS培養(yǎng)+LDL刺激組。②、④組分別在培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后加入LDL，各組細(xì)胞均培養(yǎng)96小時(shí)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)myocardin、α-SMA及SM-MHC的表達(dá)，結(jié)合形態(tài)學(xué)

4、鑒定BMSC向平滑肌樣細(xì)胞分化的情況；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測(cè) myocardin、α-SMA及SM-22α mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：光鏡顯示BMSC隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸由小圓形、多角形轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)梭形。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組、20％FBS培養(yǎng)組、20％FBS培養(yǎng)+LDL刺激組分別與常規(guī)培養(yǎng)組相比my

5、ocardin、α-SMA及SM-MHC蛋白的表達(dá)增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，n=9)；同種濃度血清培養(yǎng)，LDL作用48小時(shí)上述三種蛋白的表達(dá)最強(qiáng)；相同LDL作用時(shí)間點(diǎn)，20％FBS培養(yǎng)+LDL剌激組與常規(guī)培養(yǎng)+LDL剌激組相比上述三種蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，n=9)；α-SMA、SM-MHC蛋白的表達(dá)與myocardin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.9018，P<0.05；r=0.7969，P<0.05)

6、。RT-PCR結(jié)果顯示常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組、20％FBS培養(yǎng)組、20％FBS培養(yǎng)+LDL刺激組分別與常規(guī)培養(yǎng)組相比myocardin、α-SMA及SM-22α mRNA表達(dá)增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，n=9)；同種濃度血清培養(yǎng)，LDL作用48小時(shí)myocardin、α-SMA及SM-22α mRNA的表達(dá)最強(qiáng)；相同LDL作用時(shí)間點(diǎn)，20％FBS 培養(yǎng)+LDL刺激組與常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組相比myocardin、α-SMA及S