依博素生物合成基因ste8及ste9的生物功能和ste15表達產(chǎn)物的酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、鏈霉菌139(Streptomyces sp.139)能分泌一種新型胞外多糖依博素(Ebosin)，藥效學(xué)研究表明其在體內(nèi)具有明顯的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，有可能發(fā)展成為新型藥物。 依博素的生物合成基因簇(ste)已被克隆和鑒定，它包含27個完整的開放閱讀框架(stel—ste27)。本實驗室已對其中多個重要功能基因進行了深入研究，本文的研究對象為ste8、ste9和ste15基因。 生物信息學(xué)分析表明ste8基因的編碼產(chǎn)

2、物含有鏈長決定蛋白Wzz結(jié)構(gòu)域，Wzz結(jié)構(gòu)域參與脂多糖的生物合成并起著鏈長決定的作用。為了確定該基因在依博素生物合成中的功能，采用基因同源重組雙交換的策略對ste8進行了基因的敲除，獲得了ste8基因阻斷株Streptomyces sp.139(ste8)。和依博素相比，基因阻斷株產(chǎn)生的多糖EPS—8m中巖藻糖、木糖和葡萄糖含量降低明顯；對IL-1R拮抗活性顯著降低。出現(xiàn)了兩個不同分子量的新多糖，Mp分別為40.03×104和2.57×

3、104，顯著低于依博素分子量，基本驗證了ste8在依博素生物合成中對多糖鏈長起控制作用。 根據(jù)基因同源性分析，ste9基因的編碼產(chǎn)物含有鏈長決定蛋白Wzz的結(jié)構(gòu)域，可能對多糖鏈長也起決定的作用。采用同前方法獲得了ste9基因阻斷株Streptomycessp.139(ste9—)?；蜃钄嘀戤a(chǎn)生的多糖EPS—9m中巖藻糖、木糖和葡萄糖含量降低明顯。部分IL-1R拮抗活性喪失。也出現(xiàn)了兩種新多糖，Mp分別為41.85×104和1.

4、4061×104，均明顯低于依博素的分子量，說明ste9在依博素生物合成中對多糖鏈長也起控制作用。 對ste8和ste9進行了基因雙敲除，EPS8—9m中巖藻糖、木糖和葡萄糖降低比較明顯；對IL-1R的拮抗活性較低。EPS8—9m含兩個不同分子量的新多糖，Mp分別為41.37×104和1.4×104，均大大低于依博素，結(jié)果進一步確定了ste8和ste9在依博素生物合成中對多糖鏈長起控制作用。 為研究Ste15的生物化學(xué)性