間充質(zhì)干細胞株C3H10移植治療小鼠實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎的研究.pdf

1、目的及意義：
　　 實驗性變態(tài)反應性(自身免疫性)腦脊髓炎(Experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)是一種由活化T細胞介導的器官特異性自身免疫性疾病，主要病理特征為血管周圍炎性細胞浸潤和中樞神經(jīng)脫髓鞘反應，在臨床癥狀、生化指標及病理等方面與多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis，MS)具有相似的特征，因此EAE被認為是研究MS的良好動物模型。目前，國內(nèi)外學者多用易感動物

2、建立EAE模型，用以闡明MS及EAE的發(fā)病機制，并為其檢測病情、預防復發(fā)、合理治療方案的選擇以及新方法、新藥物的篩選等提供可靠的實驗依據(jù)，為此建立穩(wěn)定可靠的EAE動物模型是為今后開展EAE系列研究的基礎。已有研究發(fā)現(xiàn)在EAE早期將脂肪來源的間充質(zhì)干細胞經(jīng)靜脈輸注動物模型體內(nèi)，可以減輕脊髓炎癥和脫髓鞘改變，并在淋巴器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)能夠檢測到該成體干細胞(adult stemcells，ASCs)，但確切的作用及機制尚未探討。隨著對間充質(zhì)

3、干細胞(mesenchymalstem cells，MSCs)免疫學特性的深入研究，相信在不久的將來MSCs在自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)的領域中將會得到廣泛應用。本研究旨在觀察鼠源性間充質(zhì)干細胞株C3H10移植對EAE小鼠模型疾病進程的影響，為研究MS等AID的治療提供實驗基礎。
　　 方法：
　　 第一部分：24只C57BL/6J雌性10周齡小鼠隨機分成三組，即未干預對照組、C3H1

4、0細胞移植組(前兩組為實驗組)和正常對照組。實驗組用髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein，MOG35-55)加完全弗氏佐劑(complete freund adjuvant，CFA)制備抗原佐劑乳化物于腋下皮下單點單次注射免疫小鼠，分別在免疫當天和24小時后尾靜脈注射百日咳毒素(bordetella pertussisvaccine，BPV)，對照組皮下和尾靜脈注射PBS，在免疫

5、第八天通過尾靜脈注射羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFSE)染色后的C3H10細胞至細胞移植組小鼠體內(nèi)。觀察三組動物發(fā)病的臨床表現(xiàn)，按照國際通用的五分制評分法連續(xù)進行神經(jīng)功能分級評分并結合持續(xù)35天的體重測量，于免疫后第12-24天取癥狀明顯的未干預對照組小鼠和C3H10細胞移植組、正常對照組小鼠的脊髓進行冰凍切片行HE染色、Luxol F

6、ast-blue髓鞘染色觀察小鼠腦和脊髓的病理學改變，從而鑒定EAE模型是否成功，C3H10細胞移植組小鼠是否在體征表現(xiàn)、脊髓的病理學改變等方面呈現(xiàn)明顯的治療作用。
　　 第二部分：采用新鮮脊髓組織冰凍切片的方法處理C3H10細胞移植組小鼠，在熒光顯微鏡下尋找C3H10細胞并觀察其是否成功進入脊髓組織。
　　 結果：
　　 (1)動物行為學的改變：免疫后第十天開始，未干預對照組小鼠陸續(xù)出現(xiàn)EAE臨床癥狀，第14-

7、18天達到發(fā)病高峰，平均神經(jīng)功能評分為2±0.53(p<0.05)；C3H10細胞移植組小鼠有一只第14天和第18天評分為1分，正常對照組小鼠一直未出現(xiàn)臨床癥狀(0分)，持續(xù)觀察35天。(2)體重變化：未干預對照組小鼠體重呈逐漸下降趨勢，第14天體重約18.93±2.12g，第22天體重約18.65±2.04g；C3H10細胞移植組小鼠體重有上升趨勢，于免疫后第14天測體重為18.7±0.93g，免疫后第22天小鼠體重保持在19.26±

8、0.58g，兩組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。(3)病理學改變：未干預對照組小鼠腦和脊髓小血管周圍炎細胞浸潤，呈袖套狀或脫髓鞘改變，而C3H10細胞移植組和正常對照組小鼠未出現(xiàn)明顯的腦和脊髓小血管炎癥的病理變化。(4)顯微鏡下觀察：在C3H10細胞移植組小鼠的脊髓組織中觀察到有C3H10細胞形態(tài)的熒光出現(xiàn)。
　　 結論：
　　 (1)本實驗建立的小鼠模型在體征表現(xiàn)、病理變化等方面符合復發(fā)-非緩解型EAE的表現(xiàn)，模型穩(wěn)