柑橘體細胞胞質(zhì)遺傳及葉綠體SSR引物開發(fā)研究.pdf

1、該研究以38個組合的柑橘體細胞雜種(或胞質(zhì)雜種)為實驗材料,綜合應用RFLP、CAPS和cpSSR分子標記技術,對這些雜種的線粒體和葉綠體遺傳組成進行了分析;同時對實驗技術體系進行了完善與拓展,開發(fā)了柑橘葉綠體SSR標記;并對柑橘愈傷組織長期繼代保存過程中胞質(zhì)基因組遺傳變異進行了分析,主要結果如下:1、完善了柑橘類作物的DNA提取方法.2、對4個屬間組合的體細胞雜種和3個種間組合的胞質(zhì)雜種(或體細胞雜種)的5個葉綠體區(qū)域和3個線粒體區(qū)域

2、進行了CAPS分析.3、用5種限制性內(nèi)切酶對38個組合的雜種DNA進行酶切,并與12個線粒體探針隨機組合進行RFLP分析.4、對伏令夏橙+寧波金柑的體細胞雜種在1年中按月連續(xù)采樣,進行RFLP分析結合田間觀察,發(fā)現(xiàn)線粒體DNA的丟失會導致植株的枯死,表明體細胞雜種的生長異常與線粒體遺傳不穩(wěn)定性有關.5、貫穿RFLP和CAPS分析結果,38個組合中僅有14個組合檢測到了葉綠體多態(tài)性,整體上呈現(xiàn)隨機分離的趨勢.6、開展了體細胞雜種及胞質(zhì)雜種

3、的線粒體和葉綠體基因組的RT-PCR分析.7、根據(jù)黑松(Pinus thunbergii)、水稻(Oryza sativa)、煙草(Nicotiana tabacum)和擬南芥(Arabidopsis thaliana)葉綠體基因組序列設計的33引物,對柑橘類作物的總DNA進行擴增,經(jīng)過篩選得到了14對能特異擴增的引物,分別命名為SPCC1-SPCC14.8、選取23份愈傷組織材料,以對應的田間葉片作對照,對它們在長期繼代保存過程中線粒