兒童腸道菌群的組成及β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)兒童腸道菌群影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：了解兒童腸道菌群的組成和使用β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素后腸道細(xì)菌組成的影響。
　　 方法：1.標(biāo)本采集：分別采集3-5歲健康且一月內(nèi)無(wú)抗生素使用史兒童糞便樣本10例(對(duì)照組)及同年齡組一周內(nèi)有β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素使用史的兒童糞便樣本4例(抗生素組)。2.提取糞便DNA并進(jìn)行16S rRNA基因擴(kuò)增；將擴(kuò)增產(chǎn)物與擴(kuò)增質(zhì)粒連接后轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌，建立DNA克隆文庫(kù)，每個(gè)樣本分別隨機(jī)選擇160個(gè)克隆進(jìn)行DNA序列測(cè)定。3.序列分類(lèi)和種系分析

2、：保守序列直接在GenBank上進(jìn)行BLAST比較，然后用RDPⅡ9.49進(jìn)行細(xì)菌門(mén)類(lèi)及屬類(lèi)分類(lèi)。≥97％一致序列確定為同一屬，用MEGA5.0進(jìn)行相鄰合并分析繪制種系結(jié)構(gòu)圖。
　　 結(jié)果：1.對(duì)照組10個(gè)樣本測(cè)序共獲得1317個(gè)16S rRNA基因序列，抗生素組4個(gè)樣本共獲得536個(gè)16S rRNA基因序列。2.細(xì)菌門(mén)水平的分類(lèi)顯示兒童糞便中優(yōu)勢(shì)菌群為厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)，在對(duì)照組中分別占菌群總數(shù)的55.2％和40.9％，在抗生

3、素組中分別占菌群總數(shù)的50.8％和42.7％，此外，兩組中均含少量變形菌門(mén)、放線菌門(mén)、棲熱菌門(mén)和未分類(lèi)菌門(mén)。3.對(duì)照組和抗生素組兩組各主要門(mén)類(lèi)下各屬水平的分布無(wú)明顯差異并且兩組樣本分布結(jié)構(gòu)相似。4.各樣本的菌群結(jié)構(gòu)各不相同，厚壁菌門(mén)比例從12％到85.4％不等，擬桿菌門(mén)從12.7％到83％不等。
　　 結(jié)論：1.兒童糞便優(yōu)勢(shì)菌群由厚壁菌門(mén)(55.2％)、擬桿菌門(mén)(40.9％)組成，變形桿菌門(mén)、放線菌門(mén)和梭桿菌門(mén)共計(jì)少于5％；厚壁

4、菌門(mén)中Faecalibacterium(53％)、Roseburia(8.5％)和Lachnospiraceae incertae sedis(6.2％)為優(yōu)勢(shì)菌屬；擬桿菌門(mén)中Prevotella(47.2％)和Bacteroides(42.8％)為優(yōu)勢(shì)菌屬；2.不管在門(mén)或?qū)俚乃缴?，兒童糞便菌群在各個(gè)體有其獨(dú)特的菌群結(jié)構(gòu)分布；3.4例一周內(nèi)使用β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素兒童糞便樣本菌群組成與對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)分析無(wú)明顯差異，這可能與分析例數(shù)少或?qū)?/p>