8-溴-7-甲氧基白楊素對肝癌Huh-7細胞系腫瘤球形成細胞自我更新的影響.pdf

1、目的：
　　研究新型白楊素合成類似物8-溴-7-甲氧基白楊素(8-bromo-7-methoxychrysin, BrMC)抑制源自人肝細胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC) Huh-7細胞系細胞腫瘤球形成細胞即肝癌干細胞樣細胞(liver cancer stem cell like cells, LCSLCs)增殖活性、自我更新能力和下調β-catenin蛋白表達作用及其機制的探討。
　　方法

2、：
　　體外培養(yǎng)人肝癌Huh-7細胞系細胞，并用干細胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法富集和擴增LCSLCs，采用腫瘤球形成法檢測不同濃度的BrMC對LCSLCs自我更新能力的影響。MTT比色法測定BrMC對LCSLCs細胞活性的影響；異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標記CD133抗體流式細胞術(flow cytometry, FCM)分析BrMC對LCSLCs細胞的干細胞標志物CD133表達

3、的影響。同時，蛋白免疫印跡分析BrMC對LCSLCs細胞β-catenin蛋白表達的影響。
　　結果：
　　采用干細胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)7天，在體外培養(yǎng)人肝癌Huh-7細胞系細胞中得到呈典型非粘附三維生長的肝癌球體細胞即 LCSLCs。MTT比色法測定結果表明，不同濃度BrMC處理人肝癌Huh-7細胞系細胞和LCSLCs，細胞活性明顯下降，成劑量依賴性(P＜0.05),與親本Huh-7細胞系細胞比較，其抑制LCSLCs細胞活

4、性作用更強(P＜0.05)。腫瘤球形成法檢測結果顯示，在5.0～20.0μM濃度范圍內， BrMC以濃度依賴方式減少 LCSLCs的腫瘤球數目(P＜0.05)。FITC-CD133標記FCM分析結果發(fā)現BrMC以濃度依賴方式降低LCSLCs的干細胞標志蛋白CD133表達(P＜0.05)。Western blot法檢測顯示BrMC以濃度依賴方式降低LCSLCs細胞β-catenin蛋白表達(P＜0.05)。
　　結論：
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