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文檔簡介
1、目的:觀察8-溴-7-甲氧基白楊素(BrMC)抑制人小細胞肺癌(NCI-H446)細胞生長以及誘導凋亡作用,為尋找具有開發(fā)前景的肺癌治療活性新化學實體提供理論和實驗依據(jù)。
方法:以體外培養(yǎng)的人小細胞肺癌NCI-H446細胞和中國倉鼠肺上皮CHL細胞為研究對象。采用溴化四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測BrMC對NCI-H446細胞和CHL細胞活性的影響;平皿集落形成法測定NCI-H446細胞集落形成能力;PI染色流式細胞術(F
2、CM)分析NCI-H446細胞凋亡程度和細胞周期分布;DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA梯形條帶;間接免疫熒光FCM檢測BrMC對NCI-H446細胞Noxa, Mcl-1和Caspase-3蛋白的表達水平。
結(jié)果:(1) MTT比色法結(jié)果顯示,不同濃度的BrMC(0.3,1.0,3.0,10.0,30.0μM)及30.0μM的ChR分別處理NCI-H446細胞48小時后,其相對細胞活性抑制率(IR)分別為13.87%、22.14
3、%、39.05%、51.97%、61.14%和48.54%,呈濃度依賴性。30.0μM的BrMC的IR較30.0μM的ChR的IR高(P<0.05)。BrMC對CHL細胞活性的抑制作用(IC50為455.94μM)弱于其對NCI-H446細胞的作用(IC50為9.87μM),其對NCI-H446細胞的選擇指數(shù)(SI)達46(455.94/9.87);(2)平皿集落形成法結(jié)果顯示,不同濃度的BrMC(0.3,1.0,3.0,10.0,30
4、.0μM)對NCI-H446細胞集落形成的抑制率分別為9.9%、25.34%、39.63%、47.92%、61.4%;ChR30.0μM,DDP2μg/ml的集落抑制率分別是39.86%和78.57%;(3)PI染色FCM分析顯示,0.3,3.0,30.0μM的BrMC作用NCI-H446細胞48h后,其凋亡率分別為8.83%,23.7%,34.9%,其中3.0,30.0μM組較ChR30.0μM(19.7%)高;同時G1期細胞百分率分
5、別為(60.0±0.8)%、(68.4±1.5)%、(76.3±1.2)%,較空白對照組(43.6±1.25)%和30.0μM ChR(57.43±1.97)%高,呈現(xiàn)G1期阻滯現(xiàn)象。(4)DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示BrMC處理NCI-H446細胞48h,瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)典型“梯形”DNA條帶;(5)間接免疫熒光FCM分析結(jié)果顯示:Noxa蛋白的平均熒光強度分別為(1.18±0.15)%、(1.64±0.19)%、(1.95±0.2
6、6)%,呈濃度依賴性地上升,表明BrMC可誘導Noxa蛋白的表達;Mcl-1蛋白的平均熒光強度分別為(0.22±0.05)%,(0.16±0.05)%,(0.15±0.09)%,呈濃度依賴性下降,表明BrMC可下調(diào)Mcl-1蛋白的表達;Noxa/Mcl-1比值分別為(5.6±2.2)%、(12.2±3.7)%、(19.5±4.5)%,呈濃度依賴性提升,表明BrMC可上調(diào)Noxa/Mcl-1比值。Caspase-3蛋白的平均熒光強度分別為
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