5,7-二甲氧基白楊素對HepG2細胞生長和凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察5,7-二甲氧基白楊素(5,7-dimethoxychrysin,dMChR)抑制體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞的生長和誘導(dǎo)凋亡作用并初步探討其抗肝癌作用機制,為尋找具有開發(fā)前景的肝癌治療活性新化學(xué)實體提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法: MTT比色法測定dMChR對體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞和人胚肝L-02細胞增殖活性的影響,評價其對人肝癌細胞作用選擇性;細胞計數(shù)法觀察活細胞及死細胞數(shù),計算細胞存活率,繪制細胞生長曲線,評

2、價dMChR對 HepG2細胞生長的抑制作用;PI染色流式細胞計定量分析(FCM)法檢測dMChR誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡程度;AO/EB染色法熒光顯微鏡觀察dMChR誘導(dǎo)人肝癌HepG2細胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變;應(yīng)用Western blot檢測dMChR對HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白PPARγ、PTEN、p-AKt、Caspase-3表達和活性的影響。
　　結(jié)果:MTT比色法結(jié)果顯示,以濃度為1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μM

3、的dMChR分別處理人肝癌HepG2細胞48小時,其IC50值為3.22μM,其中16.0μM的dMChR作用HepG2細胞48小時的相對抑制率達79.59％,而相應(yīng)濃度的ChR和5-FU的抑制率分別為35.28%和74.01%,證明dMChR的對HepG2細胞的作用強于其ChR,而與5-FU近似。以同樣的濃度處理正常人胚肝(L-02)細胞時發(fā)現(xiàn),其對正常人胚肝(L-02)細胞的IC50值為67.68μM,提示dMChR對正常人胚肝細胞

4、的增殖活性抑制作用弱于其對人肝癌(HepG2)細胞的抑制作用,對HepG2細胞的增殖活性抑制作用選擇指數(shù)達21.03;而5-FU對正常人胚肝細胞和人肝癌細胞的IC50值分別為11.94μM和4.93μM。說明dMChR對人肝癌細胞具有較5-FU更強的相對選擇性作用。
　　細胞計數(shù)顯示:不同濃度的dMChR,5-FU和ChR均對體外培養(yǎng)HepG2細胞具有抑制生長作用,呈劑量依賴性,其作用效價高于ChR(P﹤0.05),而與5-FU類

5、似。以同樣的濃度處理正常人胚肝(L-02)細胞時發(fā)現(xiàn),dMChR和ChR對L-02細胞生長抑制作用均較5-FU弱。用終濃度為4.0μM的dMChR,5-FU和ChR連續(xù)作用4天,繪制生長曲線。發(fā)現(xiàn)dMChR(4.0μM)顯著抑制人肝癌(HepG2)細胞的生長,呈時間依賴性,其抑制作用強于先導(dǎo)化合物ChR,而與5-FU相似;而對正常人胚肝(L-02)細胞抑制作用較5-FU弱。4.0μM的dMChR可使HepG2細胞群體倍增時間由正常的20

6、.51h延長至29.72h。
　　PI染色FCM分析顯示,1.0μM,4.0μM,16.0μM的dMChR分別處理48小時,HepG2細胞凋亡率分別為4.79%,11.5%,31.5%,呈濃度依賴性。dMChR(16.0μM)誘導(dǎo)凋亡率顯著高于相同濃度ChR的凋亡率(15.2%),而與相同濃度陽性藥物5-FU相近(凋亡率為32.4%)。當以1.0μM,4.0μM,16.0μM的dMChR處理HepG2細胞48h后,與正常對照組比較

7、,AO/EB染色熒光顯微鏡下見不同程度胞質(zhì)、核呈桔紅色,核形態(tài)基本正常的早期凋亡細胞和胞質(zhì)、核呈紅色,核皺縮或碎裂的晚期凋亡細胞。其中dMChR(16.0μM)處理組凋亡指數(shù)達32.70±0.92%,顯著高于相應(yīng)濃度先導(dǎo)化合物ChR組(16.17±0.42%)。
　　Western blot分析結(jié)果表明:經(jīng)1.0,4.0,16.0μM的dMChR處理24h后,與正常對照組相比,PPARγ蛋白和PTEN蛋白表達分別上調(diào)了1.8%,7

8、.47%,15.23%和1.73%,4.7%,13.23%;p-AKt表達分別較對照組下調(diào)了6.9%,9.83%和15.4%;caspase-3表達分別上調(diào)0.27%,4.83%,5.87%。證明dMChR誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡作用至少部分依賴于PPARγ的活化。
　　結(jié)論:
　　1、dMChR抑制HepG2細胞增殖活性作用強,對人胚肝L-02細胞增殖活性抑制作用弱,其抑制HepG2細胞增殖活性作用具有相對選擇性。