eNOS基因表達對大鼠動脈硬化模型的評價.pdf

1、動脈硬化閉塞癥(Arteriosclerosis obliterans，ASO)的發(fā)病率現(xiàn)以驚人的速度呈逐年增高趨勢，已居下肢缺血性疾病的首位。而動脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)是血管系統(tǒng)疾病的主要病理基礎，動脈硬化會引起動脈壁增厚、變硬、失去彈性，最終可導致管腔狹窄、閉塞。若不加重視，輕者肢體出現(xiàn)發(fā)涼、麻木、疼痛，嚴重影響病人的生活質量，重者可致肢體壞疽，需截肢甚至導致病人死亡。由于動脈硬化閉塞癥(ASO)的發(fā)病機

2、制還不明確，所以建立動脈硬化閉塞癥(ASO)的病理動物模型，對于探明ASO的病因、病理生理、發(fā)病機制及防治藥物的研究與開發(fā)均具有重要的意義。 血管內皮可以分泌有自身調節(jié)作用的調節(jié)分子，一氧化氮(NO)就是其中之一。一氧化氮(nitric oxide，NO)在心血管系統(tǒng)具有維持血管張力、調節(jié)血壓，抑制血管平滑肌細胞遷移、增生，抑制血小板聚集與白細胞對血管壁的黏附、調節(jié)影響心肌收縮與舒張功能的作用，并在影響心率變異性與心臟重塑調節(jié)方

3、面起重要作用。作為決定NO生成的酶，一氧化氮合成酶(NOS)在體內廣泛分布，其中以內皮性一氧化氮合酶最為重要。因此，本研究首先在大鼠股—腘動脈內注入蒸餾水，通過低滲造成動脈內膜非機械性、淺表性損傷，再以高脂、高膽固醇等飼料喂飼的方法，建立大鼠動脈硬化閉塞模型。然后應用熒光定量PCR的方法檢測了eNOS基因在大鼠動脈硬化閉塞模型股—腘動脈中的表達，為進一步揭示人類動脈硬化閉塞癥的發(fā)病機制和尋找基因治療的新靶點奠定基礎。 材料與方法

4、: 一、實驗動物和材料 實驗動物：健康純種Wistar雄性大白鼠70只，體重200g(3—4月齡)。 高脂飼料：62.8％基礎飼料+20％豬油+15％膽固醇+2％膽酸鈉+0.2％丙基硫氧嘧啶+維生素D3 1、構建大鼠動脈硬化閉塞模型 暴露大鼠股—腘動脈，用小動脈夾阻斷動脈遠近端共約1.5—2cm，以特制玻璃穿刺針刺入阻斷的動脈內并注入蒸餾水，5分鐘后取下針頭和動脈夾，縫合皮膚。以高脂飼料喂養(yǎng)。

5、 2、大鼠動脈硬化閉塞模型的鑒定 分別在術后15天，30天和90天剖取大鼠的股腘動脈，HE染色和bFgf染色后光學顯微鏡下觀察，鑒定大鼠動脈硬化閉塞的程度。 3、eNOS基因在大鼠動脈硬化閉塞模型股腘動脈中的表達 分別在術后15天，30天和90天剖取大鼠的股腘動脈，提取RNA，反轉錄合成cDNA。SYBR—GREENⅠ染料法熒光定量PCR擴增比較eNOS基因在大鼠動脈硬化閉塞模型股腘動脈中的表達。 結

6、果: 1、大鼠的手術順利完成 2、成功制作大鼠動脈硬化閉塞模型 三個月后損傷+高脂組(D組)光鏡見典型的ASO病理改變；內皮細胞脫落、內彈力板破壞(中斷或消失)、結構異常、內膜肥厚、中膜平滑肌增生穿過內彈力板向內皮下遷移、結締組織增生排列紊亂，管腔狹窄、甚至血栓形成，斑塊內可見泡沫細胞，部分可見壞死和鈣化灶形成。形成與人ASO相似的、較成熟的、實驗周期短的大鼠動脈硬化閉塞模型。 3、eNOS基因在大鼠動脈

7、硬化閉塞模型股腘動脈中的表達 熒光定量PCR結果表明eNOS在動脈硬化閉塞模型大鼠股腘動脈中的相對表達量分別為0.7219(術后15天)，0.6444(術后30天)，0.4601(術后90天)，以正常對照組的相對表達量為1.0000。經(jīng)過統(tǒng)計學分析后，差異有統(tǒng)計學意義。說明eNOS在動脈硬化閉塞模型大鼠股腘動脈中表達下調。 結論: 大鼠股—腘動脈動脈內注入蒸餾水損傷內皮+高脂、高膽固醇飼料喂養(yǎng)可形成大鼠動脈硬化閉