舒郁膠囊及柴胡提取物含藥血清對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元GABABR2介導(dǎo)的ERK通路和AC-cAMP-CREB通路的影響.pdf

1、目的:觀察郁情緒大鼠模型血清對(duì)海馬神經(jīng)元GABABR2蛋白表達(dá)和ERK通路中ERK1/2蛋白的磷酸化水平的影響,并研究舒郁膠囊和柴胡提取物對(duì)其變化的糾正作用,在離體水平上初步探討抑郁情緒發(fā)病的中樞機(jī)制,并研究中藥舒郁膠囊對(duì)抑郁情緒的干預(yù)作用;同時(shí)利用GABABR2特異性激動(dòng)劑將該受體激活,檢測(cè)含藥血清對(duì)激活的下游效應(yīng)器水平的變化的影響,探討中藥舒郁膠囊對(duì)GABABR2下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用機(jī)制。
　　方法:1、本研究采用慢性溫和應(yīng)激造

2、模法制備抑郁情緒大鼠模型,調(diào)肝方藥舒郁膠囊和柴胡提取物進(jìn)行藥物干預(yù),通過糖水、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)合宏觀行為藥理學(xué)觀察對(duì)證候模型進(jìn)行評(píng)價(jià),認(rèn)定模型復(fù)制成功后,制備各組大鼠血清,采用血清藥理學(xué)方法,通過抑郁情緒大鼠模型各組血清來(lái)干預(yù)大鼠離體海馬神經(jīng)元,應(yīng)用蛋白免疫印跡技術(shù),分別檢測(cè)海馬神經(jīng)元GABABR2蛋白表達(dá)和ERK通路中ERK1/2蛋白的磷酸化水平。2、結(jié)合血清藥理學(xué)和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),利用激動(dòng)劑激活GABABR2信號(hào)通路,觀察離體海馬神經(jīng)元細(xì)胞

3、內(nèi)GABABR2介導(dǎo)ERK通路中ERK1/2蛋白和CREB蛋白的磷酸化水平和AC/cAMP/CREB通路中cAMP的含量水平的變化。
　　結(jié)果:1、與正常組大鼠相比,模型組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)總分顯著減少(P＜0.01),糖水實(shí)驗(yàn)的糖水?dāng)z入顯著降低(P＜0.01);而造模并給予舒郁膠囊、柴胡皂苷提取物和氟西汀的大鼠較模型組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)總分顯著增加(P＜0.01或P＜0.05或P＜0.01),糖水實(shí)驗(yàn)的糖水?dāng)z入顯著增加(P＜0.01或P＜0.0

4、5或P＜0.01)。蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,與正常組血清干預(yù)的海馬神經(jīng)元相比,模型組海馬神經(jīng)元GABABR2蛋白表達(dá)和P-ERK1/2水平顯著升高(P＜0.01)。造模并給予舒郁膠囊血清組、柴胡皂苷血清組和氟西汀血清組干預(yù)的大鼠海馬神經(jīng)元GABABR2蛋白表達(dá)和P-ERK1/2水平較模型血清組顯著降低(P＜0.05)。2、大鼠海馬神經(jīng)元GABABR2被特異性激動(dòng)劑激活后,與空白組海馬神經(jīng)元相比,激動(dòng)劑組海馬神經(jīng)元cAMP的含量水平、PLE

5、RK1/2和P-CREB水平均顯著增高(P＜0.01)。與激動(dòng)劑組相比,給予舒郁膠囊組和拮抗劑組干預(yù)的大鼠海馬神經(jīng)元cAMP的含量顯著降低(P＜0.01),柴胡組較激動(dòng)劑組則無(wú)顯著性差異(P＞0.05),但柴胡組cAMP的含量有明顯下調(diào)的趨勢(shì);給予GABABR2拮抗劑干預(yù)的大鼠海馬神經(jīng)元P-ERK1/2水平較激動(dòng)劑組顯著降低(P＜0.01),舒郁組無(wú)顯著降低,但是有降低趨勢(shì),柴胡組無(wú)降低趨勢(shì);給予舒郁膠囊血清組和拮抗劑組干預(yù)的大鼠海馬神

6、經(jīng)元P-CREB水平顯著降低(P＜0.05,P＜0.01),柴胡組較激動(dòng)劑組則無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:1、采用慢性溫和應(yīng)激法可以成功制備抑郁情緒大鼠模型,糖水偏好實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)合宏觀行為藥理學(xué)可有效評(píng)價(jià)模型。2、抑郁情緒大鼠模型各組血清來(lái)干預(yù)大鼠離體海馬神經(jīng)元后,大鼠海馬神經(jīng)元GABABR2蛋白表達(dá)升高,表明GABABR2與抑郁情緒關(guān)系密切,可能是抑郁情緒發(fā)病的中樞機(jī)制之一。3、中藥舒郁膠囊可以有效糾正模型GABABR2蛋白表