白香丹膠囊對PMS肝氣逆證模型大鼠的藥理機制研究—含藥血清對大鼠海馬神經(jīng)元5-HTR2C的表達(dá)及其下游IP3-DAG-Ca2+信號通路的影響.pdf

1、目的:通過離體實驗,結(jié)合中藥血清藥理學(xué)的研究方法,采用含藥血清對大鼠海馬神經(jīng)元進(jìn)行不同干預(yù),觀察調(diào)肝方藥白香丹膠囊對5-HTR2C基因在海馬神經(jīng)元中的表達(dá)以及下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,探討經(jīng)前期綜合征肝氣逆證(PMS)發(fā)病的微觀機制,進(jìn)一步探究白香丹膠囊治療PMS肝氣逆證的中樞作用機制。
　　方法:1、采用情志刺激為主多因素造模法制備PMS肝氣逆證大鼠模型,以調(diào)肝方藥白香丹膠囊進(jìn)行藥物干預(yù)。結(jié)合中藥血清藥理學(xué)方法,以含藥血清對新生大

2、鼠原代海馬神經(jīng)元進(jìn)行不同藥物干預(yù),運用Westernblot方法檢測海馬神經(jīng)元中5-HTR2C的蛋白表達(dá)水平,用Elisa法和Fluo-3/AM熒光探針檢測下游信號通路中IP3/DAG/Ca2+的含量變化。2、采用RP-HPLC色譜法檢測含藥血清中芍藥苷的含量,制備藥物體內(nèi)藥時曲線,確定動物采血時間點。對正常大鼠灌胃給予不同藥物,制備含藥血清,對體外培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)元進(jìn)行藥物干預(yù),激活5-HTR2C下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,用Elisa法

3、和Fluo-3/AM熒光探針檢測已被激活的通路中IP3/DAG/Ca2+信號的含量變化,觀察白香丹膠囊對該目的基因下游信號通路相關(guān)信號的影響。
　　結(jié)果:1、大鼠造模行為學(xué)評價結(jié)果顯示,與正常組大鼠相比,PMS肝氣逆證模型組大鼠呈顯著性差異(P＜0.001),給藥后各組較正常組均無顯著差異(P＜0.01;P＜0.05;P＜0.01)。Western-blot結(jié)果顯示,與正常血清組相比,經(jīng)過肝氣逆證模型組大鼠血清干預(yù)的海馬神經(jīng)細(xì)胞中

4、,5-HTR2C蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.001);而用藥組干預(yù)的細(xì)胞中,5-HTR2C蛋白表達(dá)均顯著性降低(P＜0.001;P＜0.05;P＜0.001)。Elisa和Ca2+相對熒光強度實驗結(jié)果顯示,肝氣逆證模型組大鼠血清干預(yù)的海馬神經(jīng)細(xì)胞中,IP3/DAG/Ca2+的含量均較正常血清組顯著性升高(P＜0.001;P＜0.001;P＜0.01),而含藥血清組其含量顯著性減低(P＜0.05;P＜0.001;P＜0.05),并趨于正

5、常水平。2、通過RP-HPLC實驗,得到芍藥苷時間-濃度藥時曲線,確定正常大鼠末次給于白香丹膠囊和白芍提取物2h后,芍藥苷濃度達(dá)到峰值。從Elisa實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常血清組相比,白香丹含藥血清組海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)IP3/DAG的含量均顯著降低(P＜0.001;P＜0.001),白芍提取物含藥血清組IP3/DAG的含量也顯著降低(P＜0.001;P＜0.001),但不及白香丹含藥血清效果顯著。從Ca2+的相對熒光強度實驗結(jié)果看出,與正常血清

6、組相比,經(jīng)過白香丹含藥血清和白芍提取物含藥血清干預(yù)的海馬神經(jīng)細(xì)胞中,Ca2+的相對熒光強度均顯著性降低(P＜0.001;P＜0.05)。
　　結(jié)論:采用情志刺激為主多因素造模法可成功制備PMS肝氣逆證大鼠模型,曠場實驗可有效評價該模型。大鼠海馬神經(jīng)元中5-HTR2C的表達(dá)與PMS肝氣逆證發(fā)病機制密切相關(guān)。白香丹膠囊含藥血清對其異常表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用,并可影響其下游信號通路中IP3/DAG/Ca2+的含量變化。說明白香丹膠囊發(fā)揮其療效