版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、糖尿病(diabetes)是一組以由胰島素分泌和(或)胰島素作用缺陷引發(fā)的以高血糖為特征的代謝疾病,受遺傳和環(huán)境因素影響;糖尿病并發(fā)癥包括大血管病變和微血管病變引起的腦卒中、失明和截肢等嚴重后果,糖尿病及其并發(fā)癥嚴重地影響著人類健康和生活質(zhì)量;胰島素是目前臨床糖尿病治療最有效最安全的一線藥物,隨著糖尿病發(fā)病率的不斷攀升,胰島素的市場需求量也不斷增加,胰島素的生產(chǎn)和研究呈現(xiàn)廣闊的應(yīng)用和發(fā)展前景。
從1922年世界上第一例糖尿
2、病患者應(yīng)用胰島素治療獲得成功至今,在臨床使用胰島素已有近90年的歷史。目前,市場上胰島素藥物主要來源于微生物發(fā)酵生產(chǎn)和組織提取,存在著體外加工程序復(fù)雜、成本高、純度低、易污染等缺點。植物系統(tǒng)生產(chǎn)藥用蛋白日益受到重視,是一個安全廉價的生產(chǎn)系統(tǒng);而植物油體系統(tǒng)利用油體蛋白的高表達和易分離特性,改進了植物生物反應(yīng)器下游加工技術(shù),降低了高純度藥用蛋白的生產(chǎn)成本。油體表達系統(tǒng)作為藥用蛋白的新來源,將得到逐步的完善及更廣泛的應(yīng)用。
本
3、研究利用油菜表達重組人胰島素原,為臨床糖尿病治療提供了新思路,為利用植物油體系統(tǒng)表達其他具有重要價值的藥用蛋白提供了技術(shù)和理論的準備。所取得的結(jié)果如下:
1.基因合成和載體構(gòu)建:從滬油15(Brassica nape cv.Huyou15)中克隆oleosin啟動子和油體蛋白(BN-V)基因,按植物偏愛密碼子設(shè)計合成重組人胰島素原基因(mins),并將其連接于oleosin基因下游構(gòu)建融合基因。為便于外源蛋白檢測和純化,在
4、油體蛋白基因前端引入6個組氨酸的histag,并最終構(gòu)建植物種子特異性表達載體op::his-og-mins-2300-twin;
2.工程菌制備:用凍融法將表達載體op::his-og-mins-2300-twin質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHAl05中,PCR檢測結(jié)果證明成功獲得了EHA105工程菌;
3.油菜遺傳轉(zhuǎn)化:用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化油菜下胚軸,在含卡那霉素(
5、40mg·L-1)培養(yǎng)基上篩選獲得160株抗性植株,PCR檢測8株為陽性,陽性率為5%;
4.基因整合:Southem blot結(jié)果證實有8株獨立轉(zhuǎn)基因油菜,靶基因hom在轉(zhuǎn)基因油菜基因組中整合拷貝數(shù)為2-5;
5.轉(zhuǎn)錄水平表達:半定量RT-PCR結(jié)果顯示,靶基因hom在3株獨立轉(zhuǎn)基因油菜植株的成熟種子中成功表達;
6.蛋白水平表達:Western blot結(jié)果顯示在2株轉(zhuǎn)基因油菜成熟種子中檢測
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 27188.用擬南芥表達重組人胰島素原研究
- 利用轉(zhuǎn)基因畢赤酵母高表達重組人胰島素.pdf
- 胰島素瘤與正常胰腺組織中胰島素原、胰島素、C肽及胰島素原-胰島素的表達.pdf
- 重組人胰島素在畢赤氏酵母中的分泌表達.pdf
- 重組人胰島素在大腸桿菌中的表達及分離純化.pdf
- 大腸桿菌生產(chǎn)制備重組人胰島素工藝
- 重組人胰島素原在畢赤酵母中的表達及分離純化的研究.pdf
- 利用畢赤酵母表達小C肽人胰島素原的研究.pdf
- 鹽析萃取分離純化血漿蛋白和重組人胰島素.pdf
- 重組畢赤酵母表達新型人胰島素原類似物的研究.pdf
- 重組人胰島素樣生長因子-1的表達載體構(gòu)建和制備工藝研究.pdf
- 45403.快速型重組人胰島素及c肽的研究
- 強力霉素調(diào)控的重組人胰島素原基因載體的構(gòu)建及體外表達研究.pdf
- 基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組人胰島素的研究.pdf
- 重組人胰島素臨床合理使用評價方法及應(yīng)用研究.pdf
- 27697.hgh,hsa雙精氨酸c肽人胰島素原的表達、加工及重組胰島素的降糖活性分析
- 利用桿狀病毒載體高效表達重組人胰島素樣生長因子1(rhIGF-1)的研究.pdf
- 單鏈重組人胰島素類似物HI-270的構(gòu)建、表達及復(fù)性.pdf
- 重組人胰島素原C肽對糖尿病視網(wǎng)膜病變的早期干預(yù)作用.pdf
- 甲亢癥患者血清胰島素原、胰島素原-免疫反應(yīng)性胰島素的變化及其臨床意義.pdf
評論
0/150
提交評論