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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分、胸主動(dòng)脈夾層與胸主動(dòng)脈瘤組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1表達(dá)的比較研究
目的:轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1是具有調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝及炎性反應(yīng)的多功能性細(xì)胞因子,目前已證實(shí)在多種結(jié)締組織相關(guān)疾病中起關(guān)鍵性調(diào)控作用。本研究旨在通過比較胸主動(dòng)脈夾層與正常主動(dòng)脈壁轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1表達(dá)的差異,以及胸主動(dòng)脈夾層與胸主動(dòng)脈瘤TGF-β1分布的差異,來探討TGF-β1在胸主動(dòng)脈夾層發(fā)病機(jī)制中的作用。
材
2、料與方法:研究標(biāo)本取自經(jīng)手術(shù)證實(shí)的胸主動(dòng)脈夾層分離患者主動(dòng)脈壁20例(TAD組)、胸主動(dòng)脈瘤患者動(dòng)脈壁38例(TAA組),對(duì)照組取自心臟移植供體正常主動(dòng)脈壁組織20例(NC組)。各組主動(dòng)脈壁組織制備5μm厚石蠟切片,采用蘇木精-伊紅染色、Verhoeff氏彈力纖維染色及Masson三色染色法分析各組病理形態(tài)及細(xì)胞外基質(zhì)彈力纖維及膠原纖維的表達(dá)特征。組織切片經(jīng)系列脫蠟、水化等處理后以抗TGF-β1及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-actin)單克
3、隆抗體作為第一抗體采用雙抗免疫熒光技術(shù),半定量TGF-β1在各組主動(dòng)脈壁中的表達(dá)并分析TGF-β1在不同主動(dòng)脈壁層次中表達(dá)的差異。分析TGF-β1與不同細(xì)胞外基質(zhì)成分分布的關(guān)系并比較TAD組與TAA組TGF-β1表達(dá)分布的差異。
結(jié)果:病理形態(tài)學(xué)顯示主動(dòng)脈夾層及動(dòng)脈瘤均以輕度到重度的動(dòng)脈中層變性或壞死伴彈力纖維減少、斷裂及膠原纖維增生為病理特征,其中主動(dòng)脈夾層組17例(85%)與動(dòng)脈瘤組29例(76.3%)患者存在動(dòng)脈中層
4、變性。TGF-β1在各組主動(dòng)脈壁內(nèi)呈不均勻分布,在中膜平滑肌層中表達(dá)水平最高,其次為內(nèi)膜層,外膜層最低。組間比較,TAD組動(dòng)脈壁全層TGF-β1為70.71±9.7(信號(hào)強(qiáng)度),TAA組TGF-β1為77.66±10.93,NC組64.54±5.18,與對(duì)照組比較分別提高9.56%、20.3%(P<0.05)。具體分布比較,中膜層TGF-β1表達(dá)TAD組79.26±12.77、TAA組86.82±13.47較對(duì)照組68.28±7.98高
5、16.09%與27.2%(P<0.01);外膜層TAD組60.04±12.07、TAA組61.52±18.29分別較對(duì)照組51.43±8.09提高16.74%與19.6%(P<0.05),但TAD組與TAA組比較無差異;而內(nèi)膜層TGW-β1值TAD組62.54±8.81與對(duì)照組62.63±6.12表達(dá)水平無差異,TAA組72.14±15.85較對(duì)照組提高15.18%(P<0.05)。病理形態(tài)分析顯示在中膜層TGF-β1主要積聚于彈力纖維
6、內(nèi),在彈力纖維中TGF-β1表達(dá)水平TAD組較對(duì)照組提高達(dá)34.83%。危險(xiǎn)因素分析顯示年齡、性別、主動(dòng)脈最大直徑、夾層分型等因素與TGF-β1表達(dá)無相關(guān)性。細(xì)胞核密度分析顯示,夾層組內(nèi)膜層及外膜層中細(xì)胞密度明顯高于動(dòng)脈瘤組(P<0.05)。
結(jié)論:TGF-β1在主動(dòng)脈壁內(nèi)呈不均勻分布,且在胸主動(dòng)脈夾層及胸主動(dòng)脈瘤患者動(dòng)脈壁中表達(dá)明顯增強(qiáng)。但TGF-β1在動(dòng)脈壁的增強(qiáng)呈不均勻分布,其中在中膜層彈力纖維中表達(dá)明顯增強(qiáng)對(duì)主動(dòng)脈
7、夾層的形成具有重要意義,提示TGF-β1與彈力纖維的相互作用與主動(dòng)脈夾層的形成相關(guān)。
第二部分、胸主動(dòng)脈夾層與胸主動(dòng)脈瘤壁彈力蛋白的表達(dá)與調(diào)控
背景:主動(dòng)脈中膜層彈力纖維網(wǎng)絡(luò)是維持主動(dòng)脈壁完整性及抵御動(dòng)脈壁搏動(dòng)性應(yīng)力的關(guān)鍵。彈力蛋白是構(gòu)成彈力纖維的最主要成分,已有的研究結(jié)果提示在胸主動(dòng)脈央層及動(dòng)脈瘤組織中存在MMP/TIMP系統(tǒng)主導(dǎo)的顯著的彈力纖維降解過程。成熟彈力纖維存在一個(gè)不斷降解并新彈力纖維蛋白修復(fù)沉積
8、的過程,而目前尚未有針對(duì)主動(dòng)脈彈力蛋白合成修復(fù)的研究。本課題部分旨在通過比較胸主動(dòng)脈夾層與胸主動(dòng)脈瘤組織彈力蛋白的表達(dá)及彈力蛋白合成代謝的差異,來探討胸主動(dòng)脈夾層的特殊病因機(jī)制。
材料與方法:研究標(biāo)本取自我院經(jīng)手術(shù)證實(shí)的胸主動(dòng)脈夾層分離患者主動(dòng)脈壁10例(TAD組)、胸主動(dòng)脈瘤患者動(dòng)脈壁10例(TAA組),對(duì)照組取自心臟移植供體正常主動(dòng)脈壁組織10例(NC組)。新鮮主動(dòng)脈壁組織迅速處理并提取總蛋白及總RNA保存?zhèn)溆?。采用W
9、estern-blotting免疫印跡技術(shù)分離組織彈力蛋白并半定量在TAD與對(duì)照組中的表達(dá)水平。采用熒光定量RT-PCR技術(shù)比較TAD、TAA與對(duì)照組組織彈力蛋白(Elastin)mRNA表達(dá)豐度,以上研究均以GAPDH或其基因作為內(nèi)參照。
結(jié)果:Western_blotting法測(cè)定TAD組8例與對(duì)照組8例胸主動(dòng)脈壁組織彈力蛋白結(jié)果顯示TAD組彈力蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組降低,其平均值TAD組為0.807_+0.159,對(duì)照
10、組為1.194+0.187,TAD組較對(duì)照組降低32.42%(P<0.001)。TAD組10例、TAA組10例及對(duì)照組10例主動(dòng)脈標(biāo)本熒光定量RT-PCR法測(cè)定彈力蛋白mRNA表達(dá)豐度,TAD組彈力蛋白mRNA較對(duì)照組及TAA組顯著降低;其表達(dá)豐度分別為TAD組3.95_+2.07,TAA組28.32_+12.95,對(duì)照組為29.71±8.65。TAD組僅為對(duì)照組與TAA組表達(dá)量的13.30%與13.95%(P<0.01)。但TAA組表
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