碘缺乏和甲狀腺功能減退對(duì)大鼠仔鼠小腦發(fā)育的損傷及ERK1-2、CREB表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的： 碘是機(jī)體必需的微量元素之一，是合成甲狀腺激素必不可少的成分。甲狀腺激素(thyroid hormone，TH)對(duì)機(jī)體的生長(zhǎng)與發(fā)育，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及其功能成熟具有廣泛而重要的影響，可促進(jìn)小腦的發(fā)育成熟。研究表明，胚胎期、新生兒期甲狀腺機(jī)能減退將導(dǎo)致小腦形態(tài)發(fā)育受阻和功能受損，嚴(yán)重的出現(xiàn)姿勢(shì)及步態(tài)異常，肌張力改變，共濟(jì)失調(diào)等。目前碘缺乏和甲狀腺功能減退損害小腦發(fā)育機(jī)制尚不完全清楚，故開展其相關(guān)機(jī)制研究具有重要意義。

2、 本研究分別通過(guò)碘缺乏飼料和丙基硫尿嘧啶(propylthiouracil，PTU)飲水建立甲狀腺功能減退模型，研究仔鼠發(fā)育各階段的生長(zhǎng)發(fā)育情況，小腦形態(tài)學(xué)改變及ERK1/2、CREB蛋白表達(dá)變化，為探明碘缺乏導(dǎo)致小腦形態(tài)改變及影響小腦發(fā)育的機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，且為碘缺乏導(dǎo)致的小腦功能性疾病的預(yù)防、早期診斷、病情控制提供理論依據(jù)與基礎(chǔ)資料。 方法： 健康2月齡雌性Wistar大鼠，交配妊娠后，取孕鼠28只按體重隨機(jī)分成

3、對(duì)照組、甲狀腺功能減退-1組(5ppm組)、甲狀腺功能減退-2組(15ppm組)和碘缺乏組，每組7只雌鼠。自妊娠第6日起，對(duì)照組繼續(xù)飼以普通飼料，飲用自來(lái)水；甲狀腺功能減退-1組給予5ppm丙基硫尿嘧啶飲水；甲狀腺功能減退-2組給予15ppm丙基硫尿嘧啶飲水，飼以普通飼料；碘缺乏組飼以缺碘地區(qū)糧食配制的飼料，飲用自來(lái)水，直至仔鼠出生后第28天(PN28)。PN7、PN14、PN21、PN28、PN42取仔鼠稱重；固相化學(xué)免疫發(fā)光法測(cè)定血

4、清中FT3、FT4、TSH；取小腦稱重，進(jìn)行相關(guān)蛋白鍍銀染色及免疫組化染色。 結(jié)果： 1、碘缺乏和甲狀腺功能減退對(duì)母鼠體重、仔鼠體重及小腦重量的影響 孕期和哺乳期碘缺乏組母鼠體重明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；5ppm組、15ppm組和碘缺乏組仔鼠體重增長(zhǎng)緩慢，碘缺乏組仔鼠小腦重量減輕，均顯著低于正常水平(P<0.05)。 2、碘缺乏和甲狀腺功能減退對(duì)仔鼠小腦組織形態(tài)的影響 PN7時(shí)，對(duì)照組、甲

5、狀腺功能減退組仔鼠小腦皮質(zhì)具有典型的層狀結(jié)構(gòu)，各層之間界限清晰，但碘缺乏組各層之間界限模糊；PN14時(shí)外顆粒層細(xì)胞向內(nèi)顆粒層遷移，外顆粒層變薄，與對(duì)照組相比，碘缺乏病組和甲狀腺功能減退組外顆粒細(xì)胞遷移延遲；PN21時(shí)，與對(duì)照組比較，15ppm組組和碘缺乏組外顆粒細(xì)胞消失延遲，仍有2～3層外顆粒細(xì)胞；PN28、42時(shí)，甲狀腺功能減退組和碘缺乏病組分子層厚度低于對(duì)照組。 3、碘缺乏和甲狀腺功能減退對(duì)仔鼠小腦皮質(zhì)ERK1/2蛋白表達(dá)的

6、影響 免疫組化染色顯示：PN7時(shí)，各組仔鼠小腦皮質(zhì)ERK1/2表達(dá)無(wú)明顯差別；PN14、PN42時(shí)，Sppm組、15ppm組和碘缺乏組仔鼠小腦皮質(zhì)ERK1/2表達(dá)顯著低于對(duì)照組，15ppm組和碘缺乏組亦低于5ppm組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PN21、PN28時(shí)，5ppm組、15ppm組和碘缺乏組仔鼠小腦皮質(zhì)ERK1/2表達(dá)顯著低于對(duì)照組，碘缺乏組仔鼠小腦皮質(zhì)ERK1/2表達(dá)顯著低于5ppm組，亦低于15ppm組，具有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4、碘缺乏和甲狀腺功能減退對(duì)仔鼠小腦皮質(zhì)CREB蛋白表達(dá)的影響 免疫組化染色顯示：PN7時(shí)，各組仔鼠小腦皮質(zhì)CREB表達(dá)均無(wú)顯著差異。PN14時(shí)，5ppm組、15ppm組和碘缺乏組仔鼠小腦皮質(zhì)CREB表達(dá)顯著低于對(duì)照組，15ppm組亦低于5ppm組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PN21時(shí)，5ppm組、15ppm組和碘缺乏組仔鼠小腦皮質(zhì)CREB表達(dá)顯著低于對(duì)照組，15ppm組和碘缺乏組亦低于

8、5ppm組，碘缺乏組亦低于15pmm組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PN28和PN42時(shí)，Sppm組、15ppm組和碘缺乏組仔鼠小腦皮質(zhì)CREB表達(dá)顯著低于對(duì)照組，15ppm組和碘缺乏組亦低于5ppm組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1、碘缺乏和甲狀腺功能減退可影響大鼠仔鼠發(fā)育，使其體重下降，小腦重量減輕。 2、碘缺乏和甲狀腺功能減退會(huì)對(duì)仔鼠小腦產(chǎn)生明顯的形態(tài)學(xué)改變，阻礙小腦的發(fā)育 3、碘