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1、目的:復(fù)制糖尿病大鼠模型,觀察中藥復(fù)方和依那普利對(duì)糖尿病大鼠腎小管PKCa和ERK1/2表達(dá)的影響,探討自擬的中藥復(fù)方和依那普利對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用的作用機(jī)制。
方法:雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組(N組),糖尿病組(D組),糖尿病中藥復(fù)方1號(hào)治療組(Y1組),糖尿病中藥復(fù)方2號(hào)治療組(Y2組),糖尿病依那普利治療組(E組)。采用鏈尿佐菌素尾靜脈注射(55mg/kg)的方法復(fù)制糖尿病動(dòng)物模型。生化方法測(cè)血糖、24h尿
2、蛋白、血肌酐、甘油三酯、膽固醇,并計(jì)算腎臟指數(shù)。HE染色光鏡檢查腎組織形態(tài)學(xué)變化。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠腎臟PKC、TGF-β1、FN、ERK1/2蛋白表達(dá)情況,RT-PCR法檢測(cè)大鼠腎皮質(zhì)ERK2mRNA水平。
結(jié)果:①D組大鼠腎臟指數(shù)、血糖、24h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯、膽固醇較N組明顯升高(P<0.01);Y1組、Y2組與D組大鼠相比,24h尿蛋白量、膽固醇、甘油三酯顯著降低(P<0.01或P<0.05);Y1組、E組
3、大鼠血肌酐較D組明顯降低(P<0.05);而Y2組大鼠血肌酐較D組有所降低,但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②D組大鼠出現(xiàn)明顯的腎臟形態(tài)學(xué)改變,系膜區(qū)基質(zhì)沉積增多,腎小管上皮細(xì)胞腫脹,空泡變性及基底膜增厚,Y1組、Y2組和E組明顯改善。③免疫組化結(jié)果顯示:N組大鼠腎小管上皮細(xì)胞PKCa蛋白少量表達(dá),D組較N組明顯增加(P<0.01),Y1組、Y2組顯著低于D組(P<0.01),E組也明顯低于D組(P<0.01),各治療組之間差異無(wú)顯著性(P>0.0
4、5)。N組大鼠腎小管上皮細(xì)胞ERK1/2蛋白具有基礎(chǔ)水平的表達(dá),D組較N組明顯增加(P<0.01),Y1組顯著低于D組(P<0.01),E組、Y2組也明顯低于D組(P<0.05),各治療組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。N組大鼠腎小管上皮細(xì)胞TGF-β1蛋白幾乎無(wú)表達(dá),D組表達(dá)明顯高于N組(P<0.01),Y1組、Y2組較D組明顯降低(P<0.05),E組也明顯低于D組(P<0.05),各治療組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。N組大
5、鼠腎小管基底膜FN蛋白表達(dá)較少,D組表達(dá)明顯高于N組(P<0.01),Y1組、Y2組較D組明顯降低(P<0.01),E組也明顯低于D組(P<0.01),各治療組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。④RT-PCR結(jié)果顯示,ERK2 mRNA在N組有基礎(chǔ)水平的表達(dá),在D組顯著增加(P<0.01),Y1組、Y2組顯著低于D組(P<0.01),E組也顯著低于D組(P<0.01),各治療組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
結(jié)論:1、依那
6、普利可能通過(guò)抑制PKCa、ERK1/2表達(dá)而減少TGF-β1的生成,使腎組織FN等ECM沉積減少,從而延緩或阻斷糖尿病腎臟肥大和纖維化,改善腎功能。2、中藥復(fù)方1號(hào)、2號(hào)對(duì)DN的防治機(jī)制可能是通過(guò)抑制PKCa-ERK1/2信號(hào)通路而下調(diào)TGF-β1的過(guò)度表達(dá),減輕腎臟肥大、減少ECM積聚,從而減輕腎臟的病理變化。3、中藥復(fù)方1號(hào)、2號(hào)可顯著降低糖尿病大鼠24h尿蛋白、甘油三酯、膽固醇的水平,明顯改善糖尿病大鼠的腎功能,發(fā)揮其保護(hù)腎臟的作
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