質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1的發(fā)現(xiàn).pdf

1、近年來，隨著多重耐藥革蘭陰性菌的增加，抗革蘭氏陰性菌感染藥物的選擇越來越有限。多粘菌素作為“最后一道防線”被重新用于臨床治療多重耐藥革蘭氏陰性菌引起的感染。細(xì)菌對多粘菌素類藥物的耐藥機制往往由染色體介導(dǎo)，但本研究在國際上，首次發(fā)現(xiàn)了可水平轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥機制MCR-1。
　　以上海某一豬場分離的大腸桿菌為研究對象，隨機選取一株黏菌素的最小抑菌濃度為8 mg/L的菌株SHP45進行研究。采用PCR方法檢測引起多粘菌素耐藥的

2、突變基因（pmrAB，phoPQ和mgrB），結(jié)果未檢測到與多粘菌素耐藥有關(guān)的基因突變。通過接合實驗成功將黏菌素耐藥性質(zhì)粒（pHNSHP45）轉(zhuǎn)移到受體菌中，接合頻率高達10-1~10-3，且pHNSHP45質(zhì)粒能通過接合或轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入肺炎克雷伯菌中，并介導(dǎo)黏菌素耐藥。通過高通量測序獲得該質(zhì)粒全序列，發(fā)現(xiàn)該質(zhì)粒全長為62105 bp,其G+C為43.0％，具有典型的IncI2型質(zhì)粒骨架，并發(fā)現(xiàn)一個1626 bp的開放閱讀框與插入序列ISAp

3、I1相連，推測此為該質(zhì)粒從外源獲得的序列，該基因被命名為mcr-1。氨基酸序列分析結(jié)果顯示MCR-1與磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移酶有60%左右的相似性，細(xì)菌脂質(zhì)A的ESI-MS分析結(jié)果證實了MCR-1功能，即通過修飾細(xì)菌細(xì)胞膜上的脂質(zhì)A而介導(dǎo)對黏菌素耐藥。對原菌SHP45和接合子進行傳代實驗，采用S1-PFGE和雜交的方法檢測該質(zhì)粒的穩(wěn)定性，分別在含黏菌素和不含黏菌素的LB溶液傳代培養(yǎng)14代，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒pHNSHP45仍能夠穩(wěn)定地存在接合子和原菌SH

4、P45中。
　　采用PCR方法進一步檢測了mcr-1在動物源大腸桿菌中的傳播及擴散情況。PCR結(jié)果顯示，在2011~2014年生肉分離的523份大腸桿菌檢測到78株（15%）攜帶 mcr-1，屠宰前動物分離的804份大腸桿菌檢測到166株（21%）攜帶 mcr-1，表明mcr-1已在動物源腸桿菌中廣泛傳播，且陽性樣本的比例在逐年增加。
　　本研究在國際上首次發(fā)現(xiàn)了質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1，mcr-1位于接合性Inc