芳香開(kāi)竅藥冰片及石菖蒲對(duì)腦得生主要活性成分透過(guò)血腦屏障影響的研究.pdf

1、一、目的：
　　 建立大鼠血漿及腦組織中羥基紅花黃色素A(HSYA)、葛根素(Puer)、川芎嗪(TMP)及人參皂苷Rg1(Rg1)的測(cè)定方法。考察配伍芳香開(kāi)竅藥冰片或石菖蒲提取液對(duì)腦得生主要活性成分在大鼠體內(nèi)的吸收以及透過(guò)血腦屏障(BBB)的影響。為芳香開(kāi)竅藥引經(jīng)入腦提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 二、方法：
　　 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及給藥方法
　　 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組選用清潔級(jí)健康成年雄性大鼠198只(220-260g

2、),按體重隨機(jī)分3組:腦得生組(Ⅰ)、腦得生配伍冰片組(Ⅱ)、腦得生配伍石菖蒲組(Ⅲ),每組6×11只。
　　 1.2給藥劑量及制備方法按照《中國(guó)藥典》2005版,冰片劑量取中等劑量日劑量28 mg·kg-1、石菖蒲日劑量3.0 g·kg-1。腦得生日劑量含HSYA20 mg·kg-1、Puer20 mg·kg-1、TMP10 mg·kg-1、Rg120
　　 mg·kg-1。石菖蒲提取液的制備:石菖蒲加蒸餾水浸泡30

3、min,加熱蒸餾,收集揮發(fā)油水混合溶液,加入適量吐溫80(終含量1％),蒸餾水定容使得到3.0g生藥/mL,的石菖蒲溶液。各組均配置成0.8％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)混懸液。
　　 1.3樣品采集大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,試驗(yàn)前一天禁食12 h。灌胃給藥后,分別于10,20,30,45 min,1,1.5,2,3,6,8,12 h摘除眼球采血,肝素抗凝,于-70℃冰箱保存。試驗(yàn)完成后在冰臺(tái)上快速取大鼠腦組織,剝離軟腦膜,生理鹽

4、水洗凈,濾紙吸干表面水分,稱重,裝入凍存管中,于-70℃冰箱保存。
　　 2生物樣品的測(cè)定方法
　　 2.1采用UPLC-MS/MS測(cè)定血漿及腦組織勻漿中腦得生主要活性成分Puer、TMP、Rg1的濃度。
　　 2.2采用HPLC測(cè)定血漿及腦組織勻漿中腦得生活性成分HSYA的濃度。
　　 3數(shù)據(jù)處理以SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理,各組大鼠腦血比(AUCbrain/AUCblood)用單因素方差分析檢驗(yàn)

5、。
　　 三、結(jié)果：
　　 1方法學(xué)
　　 1.1 Puer、TMP、Rg1的測(cè)定方法學(xué)
　　 血漿及腦組織中Puer、TMP、Rg1均與內(nèi)標(biāo)和內(nèi)源性物質(zhì)分離良好。血漿內(nèi)Puer、TMP、Rg1和內(nèi)標(biāo)各待測(cè)物保留時(shí)間分別為3.16、2.18、3.59、2.59 min,腦勻漿中各待測(cè)物的保留時(shí)間分別為3.14、2.17、3.59、2.65 min。在12.50～5000.00 ng·mL-1線性范圍內(nèi)各待

6、測(cè)物在血漿及腦組織中的線性良好,最低定量限分別為10 ng·mL-1、12.5 ng·mL-1、10 ng·mL-1。血漿中萃取回收率各待測(cè)物>80.77％,腦勻漿中各待測(cè)物>78.13％,日間和日內(nèi)精密度在血漿中各待測(cè)物<10.27％,腦勻漿中各待測(cè)物低濃度<16.12％,中、高濃度<11.88％。
　　 1.2 HSYA的測(cè)定方法學(xué)
　　 血漿及腦組織內(nèi)HSYA均與內(nèi)標(biāo)和內(nèi)源性物質(zhì)很好的分離。HSYA和內(nèi)標(biāo)的出峰時(shí)間

7、分別為6.2 min和11.9 min。在40.00～2000.00 ng·mL-1線性范圍內(nèi)HSYA血漿及腦組織中線性良好,最低定量限均為40.00 ng·mL-1。血漿及腦組織內(nèi)HSYA的萃取回收率分別>85.07％、>83.49％；日內(nèi)精密度RSD分別<11.20％、<5.13％；日間精密度RSD分別<8.15％、<9.14％。
　　 2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組中HSYA的AUCbrain/AUCblood分別

8、為0.694±0.044、0.98±0.054及1.64±0.082；Puer的AUC brain/AUC blood分別為0.58±0.11、0.61±0.04及0.78±0.04；TMP的AUC brain/AUC blood分別為0.00694±0.00085、0.0072±0.0010、0.014±0.0022。Rg1在血漿中的AUC0→12分別為9289.98±1750.48、13792.73+2065.88、15620.05

9、±2936.68,在腦組織中未被檢測(cè)到。
　　 四、結(jié)論：
　　 1方法學(xué)
　　 本實(shí)驗(yàn)方法可準(zhǔn)確、快速測(cè)定大鼠血漿及腦勻漿中HSYA、Puer、TMP、Rg1濃度,用以芳香開(kāi)竅藥對(duì)腦得生主要活性成分透過(guò)BBB影響的考察。
　　 2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　 冰片促進(jìn)HSYA、Puer、TMP、Rg1吸收入血并增加HSYA、Puer、TMP腦組織內(nèi)濃度,可有效增加BBB的通透性；石菖蒲提取液抑制HSYA、Pu