石菖蒲活性成分醒腦開竅、透過血腦屏障作用機(jī)制研究.pdf

1、血腦屏障(blood-brain bartier,BBB)是在腦和脊髓的毛細(xì)血管與神經(jīng)組織之間存在的一個(gè)動(dòng)態(tài)的調(diào)節(jié)界面，能夠阻止絕大多數(shù)外源性物質(zhì)透過，并選擇性的將腦內(nèi)有害物質(zhì)或過剩物質(zhì)泵出腦外，維持腦內(nèi)微環(huán)境的穩(wěn)定。但是，BBB對(duì)許多有價(jià)值的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)藥物的通透性也很低，嚴(yán)重影響了藥物的療效。因此，關(guān)于BBB的研究越來越多的受到人們的關(guān)注。 中藥中芳香類藥物“醒腦開竅”的作用主要是指開竅啟閉、宣發(fā)神氣，調(diào)神定志，使

2、心神復(fù)明，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為是增加BBB的通透性，促進(jìn)其他CNS藥物進(jìn)入腦組織，發(fā)揮療效。石菖蒲是傳統(tǒng)的芳香開竅藥之一，民間單用或與其他中藥配伍使用廣泛，主要用于腦病的治療，有確切的療效，提示石菖蒲對(duì)BBB有一定作用。本文主要研究石菖蒲醒腦開竅、透過血腦屏障的有效成分及其作用機(jī)制，為中藥“芳香走竄、引藥上行”提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 按照《中國藥典》2005版一部附錄揮發(fā)油提取法甲法，提取揮發(fā)油，提取率約為1.58％，去油水煎液濃縮至

3、1g/ml. 采用氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)聯(lián)用儀檢測(cè)揮發(fā)油樣品中含有α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、愈創(chuàng)木烯、菖蒲烯酮，相同條件下檢測(cè)服用揮發(fā)油后大鼠的腦脊液，結(jié)果顯示α-細(xì)辛醚，β-細(xì)辛醚可透過BBB進(jìn)入腦脊液。 采用液相色譜-質(zhì)譜(HPLC/MS)聯(lián)用儀測(cè)定去油水煎液樣品及灌服去油水煎液的大鼠腦脊液樣品，檢測(cè)到三個(gè)化合物，分子量分別為396，452，339，已知石菖蒲化合物中尚未包括。 透射電鏡下觀察給藥前后大鼠

4、大腦皮層BBB的超微結(jié)構(gòu)，可發(fā)現(xiàn)石菖蒲各提取部分均可使BBB內(nèi)皮細(xì)胞之間的緊密連接(tight junction，TJ)疏松，但BBB基本完整，尚未破壞。 以冰片為陽性藥，初步探討石菖蒲各提取部分對(duì)伊文思蘭(EB)透過BBB的促進(jìn)作用，即以EB在腦內(nèi)的含量反映BBB的通透性，統(tǒng)計(jì)分析表明冰片在灌胃2.5h后腦內(nèi)EB含量顯著高于空白組(P<0.01)，石菖蒲在11.7g/kg劑量下自給藥0.5h至2.5h未見明顯作用；延長(zhǎng)石菖蒲給

5、藥時(shí)間，石菖蒲揮發(fā)油劑量為23.4g/kg和11.7g/kg時(shí)，5h后腦內(nèi)EB含量顯著高于空白組(P<0.05)，且有劑量依賴性趨勢(shì)；總藥劑量為11.7g/kg時(shí)，5h后腦內(nèi)EB含量顯著高于空白組(P<0.01)。石菖蒲各提取部分給予小鼠灌胃一周后，腹腔注射苯妥英鈉，采用HPLC方法檢測(cè)苯妥英鈉在腦內(nèi)的濃度，結(jié)果顯示：石菖蒲總組動(dòng)物腦內(nèi)苯妥英鈉的含量較高于未給石菖蒲組動(dòng)物腦內(nèi)的苯妥英鈉含量，4h后仍保持較高濃度(P<0.01)。

6、 利用HPLC-ECD檢測(cè)腦組織內(nèi)5-羥色胺(5-HT)的濃度，統(tǒng)計(jì)分析得：與空白組比較，揮發(fā)油組小鼠大腦中5-HT的含量增加(P<0.05)，石菖蒲水煎液組及總藥組中5-HT的含量顯著增加(P<0.01)。 應(yīng)用Hela細(xì)胞系作為評(píng)價(jià)石菖蒲對(duì)BBB上P-糖蛋白活性的載體，0.5h時(shí)石菖蒲各部分(揮發(fā)油、水煎液、總藥)可明顯增強(qiáng)長(zhǎng)春新堿(VCR)的細(xì)胞毒性(P<0.01)；8h后揮發(fā)油部分仍可明顯增強(qiáng)VCR的細(xì)胞毒性(P<0.0

7、1)，揮發(fā)油的藥效維持時(shí)間明顯長(zhǎng)于陽性藥維拉帕米(VER)(P<0.01)：24h后，陽性藥及石菖蒲各部分對(duì)VCR的細(xì)胞毒性無明顯影響(P>0.05)。 完成上述工作的基礎(chǔ)上，采用兩次酶消化、梯度離心的方法分離得到純度較高的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，原代培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，嘗試建立血腦屏障體外模型。 綜上，石菖蒲能夠影響大鼠BBB的超微結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)BBB對(duì)EB的通透性，促進(jìn)CNS藥苯妥英鈉進(jìn)入腦內(nèi)的含量增加，具有開啟BBB、