核型Vasohibin-2在人胚胎組織、多器官腫瘤及正常組織中的表達及促增殖功能的初步研究.pdf

1、背景：Vasohibin（VASH）是近年來發(fā)現的一族新基因，該基因家族目前由VASH1及VASH2共同組成。VASH2具有與VASH1具有截然相反的功能:對血管生成起促進作用。最近，VASH2還被發(fā)現在多種實體腫瘤中具有促進腫瘤血管生成的作用。兇此，VASH家族被認為在胚胎發(fā)育及多種實體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中通過調控血管生成起促瘤作用。在分析VASH2蛋白細胞內定位時發(fā)現:編碼355個氨基酸的VASH2蛋白定位于胞漿中，而編碼311個

2、氨基酸的VASH2蛋白定位于胞核中;根據VASH2蛋白不同變構體的細胞內差異定位，我們將VASH2分為胞漿型及核型?，F有研究主要集中于胞漿型VASH2，而核型VASH2蛋白的相關研究尚無報道。我們首次分析了胞核型VASH2在不同胎齡人胚胎組織、多器官腫瘤及正常組織中的表達及相關功能。
　　目的：⑴研究不同胎齡人胚胎組織中胞核VASH2表達與細胞增殖作用的相關性。⑵研究人多器官腫瘤及正常組織中胞核VASH2表達及促細胞增殖功能。

3、r>　　方法：①購買26個器官/78點的胚胎組織芯片。免疫組化檢測核型VASH2的表達，并分析核型VASH2表達與胚胎組織細胞增殖的相關性。進一步免疫熒光分析VASH2蛋白在人胚腎細胞293T的表達水平和細胞中的表達部位。MTT法檢測核型VASH2對293T細胞活性的影響，流式細胞儀檢測細胞周期。②購買547點的人多器官腫瘤及正常組織芯片，免疫組化檢測核型VASH2的表達并分析核型VASH2表達與細胞增殖的相關性。進一步免疫組化檢測Ki

4、-67與核型VASH2表達水平差異，驗證核型VASH2與細胞增殖的相關性。構建核型VASH2過表達汗擾穩(wěn)轉肝臟腫瘤及正常細胞模型。檢測穩(wěn)轉肝臟腫瘤及正常細胞BrdU光吸收度;流式細胞儀檢測細胞周期并分析過表達/干擾穩(wěn)轉肝臟腫瘤及正常細胞周期的變化;
　　結果：⑴購買了臨床資料完整的胚胎組織芯片。胞核型VASH2除了在已經發(fā)育完善的心臟組織中表達陰性或弱表達，在其他胚胎組織中顯著高表達。核型VASH2的表達與胚胎細胞核分裂指數明顯正

5、相關。轉染核型VASH2可促進293T細胞的生長;轉染核型VASH2細胞的G2+S期較空白組及干擾組增加，比較差異有顯著性。⑵胞核型VASH2除了在已經發(fā)育完善的成熟組織中表達陰性或弱表達，在其他處于分裂增殖狀態(tài)正常及腫瘤組織中顯著高表達。Ki-67檢測證實核型VASH2的表達與細胞增殖存在相關性。過表達核型VASH2上調肝臟腫瘤及正常細胞中BrdU水平;干擾核型VASH2下調肝臟腫瘤及正常細胞中BrdU水平。轉染核型VASH2肝臟腫瘤