核型Vasohibin-2在人胚胎組織、多器官腫瘤及正常組織中的表達(dá)及促增殖功能的初步研究.pdf

1、背景：Vasohibin（VASH）是近年來發(fā)現(xiàn)的一族新基因，該基因家族目前由VASH1及VASH2共同組成。VASH2具有與VASH1具有截然相反的功能:對(duì)血管生成起促進(jìn)作用。最近，VASH2還被發(fā)現(xiàn)在多種實(shí)體腫瘤中具有促進(jìn)腫瘤血管生成的作用。兇此，VASH家族被認(rèn)為在胚胎發(fā)育及多種實(shí)體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中通過調(diào)控血管生成起促瘤作用。在分析VASH2蛋白細(xì)胞內(nèi)定位時(shí)發(fā)現(xiàn):編碼355個(gè)氨基酸的VASH2蛋白定位于胞漿中，而編碼311個(gè)

2、氨基酸的VASH2蛋白定位于胞核中;根據(jù)VASH2蛋白不同變構(gòu)體的細(xì)胞內(nèi)差異定位，我們將VASH2分為胞漿型及核型?，F(xiàn)有研究主要集中于胞漿型VASH2，而核型VASH2蛋白的相關(guān)研究尚無報(bào)道。我們首次分析了胞核型VASH2在不同胎齡人胚胎組織、多器官腫瘤及正常組織中的表達(dá)及相關(guān)功能。
　　目的：⑴研究不同胎齡人胚胎組織中胞核VASH2表達(dá)與細(xì)胞增殖作用的相關(guān)性。⑵研究人多器官腫瘤及正常組織中胞核VASH2表達(dá)及促細(xì)胞增殖功能。

3、r>　　方法：①購買26個(gè)器官/78點(diǎn)的胚胎組織芯片。免疫組化檢測(cè)核型VASH2的表達(dá)，并分析核型VASH2表達(dá)與胚胎組織細(xì)胞增殖的相關(guān)性。進(jìn)一步免疫熒光分析VASH2蛋白在人胚腎細(xì)胞293T的表達(dá)水平和細(xì)胞中的表達(dá)部位。MTT法檢測(cè)核型VASH2對(duì)293T細(xì)胞活性的影響，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。②購買547點(diǎn)的人多器官腫瘤及正常組織芯片，免疫組化檢測(cè)核型VASH2的表達(dá)并分析核型VASH2表達(dá)與細(xì)胞增殖的相關(guān)性。進(jìn)一步免疫組化檢測(cè)Ki

4、-67與核型VASH2表達(dá)水平差異，驗(yàn)證核型VASH2與細(xì)胞增殖的相關(guān)性。構(gòu)建核型VASH2過表達(dá)汗擾穩(wěn)轉(zhuǎn)肝臟腫瘤及正常細(xì)胞模型。檢測(cè)穩(wěn)轉(zhuǎn)肝臟腫瘤及正常細(xì)胞BrdU光吸收度;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期并分析過表達(dá)/干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)肝臟腫瘤及正常細(xì)胞周期的變化;
　　結(jié)果：⑴購買了臨床資料完整的胚胎組織芯片。胞核型VASH2除了在已經(jīng)發(fā)育完善的心臟組織中表達(dá)陰性或弱表達(dá)，在其他胚胎組織中顯著高表達(dá)。核型VASH2的表達(dá)與胚胎細(xì)胞核分裂指數(shù)明顯正

5、相關(guān)。轉(zhuǎn)染核型VASH2可促進(jìn)293T細(xì)胞的生長(zhǎng);轉(zhuǎn)染核型VASH2細(xì)胞的G2+S期較空白組及干擾組增加，比較差異有顯著性。⑵胞核型VASH2除了在已經(jīng)發(fā)育完善的成熟組織中表達(dá)陰性或弱表達(dá)，在其他處于分裂增殖狀態(tài)正常及腫瘤組織中顯著高表達(dá)。Ki-67檢測(cè)證實(shí)核型VASH2的表達(dá)與細(xì)胞增殖存在相關(guān)性。過表達(dá)核型VASH2上調(diào)肝臟腫瘤及正常細(xì)胞中BrdU水平;干擾核型VASH2下調(diào)肝臟腫瘤及正常細(xì)胞中BrdU水平。轉(zhuǎn)染核型VASH2肝臟腫瘤