微小隱孢子蟲表面抗原CP23基因、CP15-60-23復(fù)合基因載體的構(gòu)建、表達(dá)及其保護(hù)性的研究.pdf

1、隱孢子蟲(Cryptosporidium)是一種屬于頂端復(fù)合物門的寄生性原蟲，是Tyzzer于1907年首先在實(shí)驗(yàn)小鼠胃腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)的(小鼠隱孢子蟲)。隱孢子蟲有許多種類，其有效蟲種有10種，對(duì)人和大多數(shù)脊椎動(dòng)物造成感染的主要是Tyzzer于1912年發(fā)現(xiàn)的另一種蟲種微小隱孢子蟲(C.parvum)。隱孢子蟲感染引起的隱孢子蟲病(Cryptosporidiosis)是一種全球性的人畜共患寄生蟲病，但直至80年代以后才逐漸引起重視。免疫力正

2、常的人感染隱孢子蟲后，雖可引起急性腹瀉，但常為自限性;免疫力低下、功能缺陷或免疫抑制的患者(如嬰幼兒、艾滋病患者、營(yíng)養(yǎng)不良者、器官移植后、腫瘤患者等)感染此蟲后，則可引起嚴(yán)重胃腸炎并伴有水樣腹瀉，導(dǎo)致大量體液丟失而危及生命。該病已被確定為引起人腹瀉的六大病因之一。在艾滋病(AIDS)患者中感染率高達(dá)48％左右，長(zhǎng)期的嚴(yán)重腹瀉，是艾滋病病人的重要致死因素之一。該蟲致病力較強(qiáng)，小劑量(50％感染劑量ID50為132個(gè)卵囊)的微小隱孢子蟲卵囊

3、足以引起血清呈陰性的健康自愿受試者感染。由于隱孢子蟲卵囊體積微小(直徑4-6μm)、分布廣泛，常規(guī)氯化飲水消毒方法不能將其殺滅，故對(duì)人類公共衛(wèi)生造成很大威脅。國外暴發(fā)流行時(shí)有報(bào)告，多發(fā)生于病人或病牛接觸后的人群，或幼兒園和托兒所等集體單位。據(jù)估計(jì)，發(fā)生在美國威斯康星州(Wisconsin)密爾沃基(Milwaukee)的那次暴發(fā)中，超過400，000居民染上了水樣腹瀉，致死100多人，危害非常大。所以，隱孢子蟲病成為目前各國重點(diǎn)研究的寄

4、生蟲病之一。我國自1987年南京報(bào)道首例隱孢子蟲病以來，江蘇、浙江、安徽、福建、內(nèi)蒙古、云南、四川、山東及上海等省市均已證實(shí)有該病存在，其感染率為1.4％-13.3％。自從發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲以來，許多研究者一直致力于該病的防治研究，但迄今為止，對(duì)該病尚無有效的防治措施，因此對(duì)該病的早期診斷、治療以及研究防治該病的疫苗就顯得尤為重要。正確的早期診斷能及時(shí)控制該病的流行蔓延，減少損失，最大限度減少病人的死亡。目前，實(shí)驗(yàn)室鑒定和檢測(cè)隱孢子蟲的主要方

5、法有消化道粘膜活檢法、體外培養(yǎng)法、病原學(xué)檢查法、免疫學(xué)檢查法及分子生物學(xué)檢查法。這些方法或者給病人帶來痛苦(消化道粘膜活檢法)，或者費(fèi)時(shí)費(fèi)力難以控制(體外培養(yǎng)法)，或者敏感性和特異性不高(病原學(xué)檢查法)，或者需要特殊的儀器設(shè)備難以在基層推廣應(yīng)用(分子生物學(xué)檢查法)。作為免疫學(xué)檢查法之一的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，操作簡(jiǎn)便，不需要特殊儀器設(shè)備，易于標(biāo)準(zhǔn)化，經(jīng)濟(jì)，特別是應(yīng)用堿性磷酸酶標(biāo)記，催化速度快，穩(wěn)定性高，容易交聯(lián)，底物穩(wěn)定，檢測(cè)

6、本底低。國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用ELISA在隱孢子蟲診斷應(yīng)用方面進(jìn)行了大量的嘗試，取得了一定成果。然而，因隱孢子蟲與其它原蟲一樣，抗原成分復(fù)雜，真正有診斷意義的抗原成分在整個(gè)蟲體中占的比例較少；并且隱孢子蟲蟲體小，獲取高純度的蟲體抗原較難等因素影響了檢測(cè)的敏感性和特異性，限制了其實(shí)際應(yīng)用。因此，解決隱孢子蟲特異抗原的問題成為解決隱孢子蟲的檢測(cè)與診斷的關(guān)鍵技術(shù)問題。 本研究利用分子生物學(xué)技術(shù)，將編碼表面抗原CP23和CP15/60的基因構(gòu)建