胰甘油三酯脂酶在大鼠創(chuàng)傷性腦損傷及體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞中表達變化的研究.pdf

1、胰甘油三酯脂酶（pancreatic triglyceride lipase，PTL），是甘油三酯脂酶家族的一個成員，在脂質(zhì)的消化與吸收中發(fā)揮非常重要的作用。神經(jīng)系統(tǒng)中，脂質(zhì)是髓鞘的主要成分，神經(jīng)損傷后再生與修復過程中脂質(zhì)代謝變化是目前神經(jīng)科學領(lǐng)域的研究熱點之一。已有研究表明，甘油三酯脂酶家族的其他成員內(nèi)皮性脂酶和脂蛋白脂酶等與髓鞘形成和神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的再生與修復過程密切相關(guān)，那么，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（centralnervous syst

2、em，CNS）損傷后及相關(guān)因子處理的體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中，PTL表達是否發(fā)生變化呢?這些表達變化的意義何在?
　　 目的：建立大鼠創(chuàng)傷性腦損傷（Traumatic brain injury，TBI）模型，研究PTL在CNS受損后的表達變化情況，探討它在CNS損傷與修復中的功能與意義。利用炎癥分子細菌內(nèi)毒素LPS刺激星形膠質(zhì)細胞，檢測PTL的表達變化，進一步探討PTL在星形膠質(zhì)細胞中所發(fā)揮的作用。
　　 方法：采用刀片劃

3、傷的方法建立大鼠創(chuàng)傷性腦損傷模型，首先運用RT-PCR，Western blot檢測PTL在腦損傷后不同時間點的表達變化；然后利用免疫熒光雙標觀察PTl在大腦中的表達變化與細胞定位；運用免疫熒光雙標標記PTL與星形膠質(zhì)細胞標記物GFAP，神經(jīng)元細胞標記物NeuN檢測PTL在腦損傷后細胞定位的改變；免疫熒光雙標法標記不同細胞和細胞增殖標記物PCNA與細胞凋亡標記分子caspase-3；應用Western blot的方法檢測GFAP、PCN

4、A、eyclinD1、caspase-3和bcl-2的蛋白表達變化；體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞，應用不同濃度的LPS對星形膠質(zhì)細胞進行刺激，應用Western blot和免疫熒光雙標檢測PTL的表達變化和亞細胞定位的改變。
　　 結(jié)果：RT-PCR檢測結(jié)果指出，PTL的mRNA水平在大鼠腦損傷后表達逐漸增加，損傷后3d達到最高峰，之后逐漸下降；Western blot結(jié)果提示PTL蛋白水平變化與mRNA水平變化趨勢相似：免疫熒光雙標表

5、明，腦損傷前，PTL主要表達在神經(jīng)元中，在星形膠質(zhì)細胞中表達較少；腦損傷3d后，PTL在星型膠質(zhì)細胞中表達增加；腦損傷后，GFAP、PCNA和cyclinD1表達增加，損傷后3d達到最高峰，之后表達降低，與PTL的表達變化基本一致；caspase-3和bcl-2表達變化證實細胞凋亡的趨勢和PTL的表達變化趨勢也基本一致，caspase-3在TBI后主要表達在神經(jīng)細胞中，說明損傷后3d不僅是細胞增殖高峰，也是神經(jīng)元凋亡高峰。不同濃度LPS