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文檔簡介
1、目的:研究縫隙連接和縫隙連接蛋白在人骨髓基質(zhì)干細胞體外向軟骨分化過程中的作用。
方法:體外培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)干細胞(hMSCs),取第3代細胞,以生長分化因子-5(GDF-5)(100ng/ml)和縫隙連接阻斷劑甘珀酸(carbenoxolone,CBX)(2μmol/L)干預培養(yǎng),分3個實驗組,A:對照組。B:GDF-5組。C:CBX組。MTT法測定甘珀酸對人骨髓基質(zhì)干細胞增殖的影響,免疫熒光細胞化學法檢測軟骨細胞特異性Ⅱ型
2、膠原的表達,Western blotting檢測Cx43蛋白的表達,阿辛蘭染色蛋白多糖,利用激光共聚焦檢測熒光并繪制熒光恢復曲線。
結(jié)果:MTT結(jié)果顯示2μmol/L濃度甘珀酸對hMSCs的增殖不產(chǎn)生影響,對細胞沒有毒性抑制作用;免疫熒光細胞化學染色結(jié)果顯示CBX能夠抑制Ⅱ型膠原蛋白的表達(p<0.05);Western blotting結(jié)果表明CBX對Cx43蛋白的表達無明顯作用;阿辛蘭染色結(jié)果顯示CBX酸抑制分化細胞分
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