骨髓間充質(zhì)干細胞骨向分化過程中cx3cl1基因表達分析.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細胞具有多向分化潛能，其取材、分離、純化相對容易，細胞增殖能力較強，無論在體外和體內(nèi)均能很好地被轉化誘導為成骨細胞，已成為常用的骨組織工程種子細胞來源之一。 盡管目前已建立較好的BMSCs骨向分化的誘導體系，但其誘導機制的尚未明晾，在本課題組的前期研究中，運用基因芯片技術，分析BMSCs骨向分化過程中基因表達模式，發(fā)現(xiàn)cx3c11基因與BMSCs的骨向分化密切相關。因此，本研究采用定量PCR方法進一步分析cx3c11

2、基因在BMSCs體外骨向分化過程中的表達情況及其規(guī)律，以揭示其可能的作用機理。 研究方案：①本實驗從大鼠脛骨抽取骨髓，采用密度梯度離心結合貼壁培養(yǎng)法分離純化BMSCs，傳代擴增，并進行常規(guī)骨向分化誘導。通過細胞形態(tài)學觀察及MTT分析觀察細胞生長及增殖情況，并采用定性和定量堿性磷酸酶檢測、Von Kossa’s礦化結節(jié)染色等方法檢測細胞骨向誘導分化結果。②采用實時熒光定量PCR技術，對cx3c11基因在BMSCs骨向分化不同時期(

3、4天、1周、2周，3周)的表達及其變化趨勢進行定量分析。 研究結果：①采用密度梯度離心及貼壁培養(yǎng)法相結合的分離培養(yǎng)方法能有效分離、純化大鼠BMSCs，經(jīng)骨向誘導分化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞群落中可見礦化結節(jié)，細胞ALP活性顯著提高，Von Kossa’s礦化結節(jié)染色陽性，表明BMSCs經(jīng)礦化誘導后表現(xiàn)為成骨細胞的特點與表征。②大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在骨向分化過程中cx3c11基因表達上調(diào)，與骨髓間充質(zhì)干細胞自然傳代生長相比，該基因表