腎癌患者外周血漿miR-144作為腎癌早期診斷標(biāo)志物的篩選及鑒定.pdf

1、目的：目前腎癌仍缺乏簡(jiǎn)易、非侵襲性的早期診斷和治療隨訪的標(biāo)志物。我們研究腎透明細(xì)胞癌術(shù)前術(shù)后血漿中miRNAs表達(dá)譜的差異，篩選出能夠作為腎透明細(xì)胞癌早期診斷及其治療隨訪的生物學(xué)標(biāo)志物。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)用microarray芯片（包含1523個(gè)人類成熟miRNA探針）檢測(cè)5對(duì)腎透明細(xì)胞癌及3對(duì)腎錯(cuò)構(gòu)瘤術(shù)前及術(shù)后7天血漿（所有患者的腫瘤直徑均小于3cm）中miRNAs的表達(dá)，并利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法分析腎癌術(shù)前術(shù)后血漿中miRNAs的

2、表達(dá)差異(按篩選條件fold change>2,p<0.05)。然后利用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證血漿（包含50對(duì)腎癌術(shù)前術(shù)后血漿、20例腎錯(cuò)構(gòu)瘤血漿及30例健康人血漿）中miR-144的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：對(duì)比腎癌術(shù)前及術(shù)后血漿miRNAs表達(dá)譜，5個(gè)miRNAs具有顯著差異。其中1個(gè)miRNAs在腎癌術(shù)前血漿中下調(diào)，4個(gè)miRNA上調(diào)；實(shí)時(shí)定量PCR顯示miR-144在腎透明細(xì)胞癌血漿表達(dá)水平明顯上調(diào)，顯著高于其術(shù)后水平和對(duì)照

3、（包括腎錯(cuò)構(gòu)瘤及健康人）水平，同時(shí)miR-320c在腎癌及腎錯(cuò)構(gòu)瘤術(shù)前術(shù)后血漿中表達(dá)穩(wěn)定，同時(shí)miR-320c在腎癌及腎錯(cuò)構(gòu)瘤術(shù)前術(shù)后血漿中表達(dá)穩(wěn)定，可作為外周血漿中miRNAs表達(dá)量的內(nèi)參照。
　　結(jié)論：成功建立一套標(biāo)準(zhǔn)化提取及檢測(cè)外周血漿中miRNAs的方法，發(fā)現(xiàn)hsa-miR-320c可以作為檢測(cè)外周血漿中miRNAs表達(dá)量的內(nèi)參照，而syn-cel-miR39可以作為外參照，為外周血漿中miRNAs作為腫瘤標(biāo)志物的研究提供