血漿中差異microRNAs作為胃癌診斷分子標(biāo)志物的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文血漿中差異micrNAs作為胃癌診斷分子標(biāo)志物的研究姓名：李琛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：劉炳亞；燕敏；陳雪華；陳雪華；陳軍201105miRNAs的表達(dá)。篩選胃癌病人術(shù)前與健康對(duì)照者間、胃癌病人術(shù)前與術(shù)后間均有顯著差異的miRNAs進(jìn)入大樣本的驗(yàn)證。第三部分：收集胃癌病人180例、胃癌前病變病人20例、結(jié)直腸癌病人20例和健康對(duì)照志愿者80例的血漿樣本，分別檢測(cè)各組中由第二部分篩選出的差異miRNA

2、s在血漿中的表達(dá)。分析胃癌病人血漿中miRNAs表達(dá)與胃癌臨床病理特點(diǎn)的相關(guān)性，利用ROC曲線比較它們對(duì)胃癌診斷的AUCs，并與傳統(tǒng)的腫瘤指標(biāo)比較它們對(duì)胃癌判斷的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。【結(jié)果】在miRNA芯片篩選的959個(gè)人類(lèi)miRNAs中，通過(guò)比較胃癌病人和健康對(duì)照者血漿中miRNA的表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)44個(gè)miRNAs有顯著差異，其中37個(gè)miRNAs顯著上調(diào)，7個(gè)miRNAs顯著下調(diào)。利用這44個(gè)差異miRNAs進(jìn)行聚類(lèi)分析，能較好地

3、將胃癌病人和健康對(duì)照者區(qū)分開(kāi)。設(shè)定2倍差異表達(dá)為cutoff值，差異最顯著的5個(gè)上調(diào)的miRNAs(miRNA199a3p、miRNA26b、miRNA1515p、let7f和1et7a)和2個(gè)下調(diào)的miRNAs(miRNA198和miRNA720)進(jìn)入下一步的定量RTPCR篩選。在5個(gè)上調(diào)的miRNAs中，與健康對(duì)照比較，胃癌病人血漿中miRNA199a3p(P=0002)和miRNA1515p(P=0002)的表達(dá)量顯著升高。行胃癌

4、切除術(shù)后血漿中miRNA一199a3p和miRNA1515p的表達(dá)均較手術(shù)前有顯著下降(P005)。而血漿中miRNA一26b(P0615)、let一7f(P=0692)、let7a(P0429)和下調(diào)的miRNA198(P=0725)及miRNA720(P=0661)1約表達(dá)量在胃癌病人和健康對(duì)照組間無(wú)顯著差異。因此，篩選出miRNA199a3p和IIliRNA1515p進(jìn)入下一步的大樣本驗(yàn)證。大樣本的驗(yàn)證中，180例胃癌病人血漿中m

5、iRNA199a3p的表達(dá)量分別較健康對(duì)照者(P0001)，胃癌前病變者(P=0004)和結(jié)直腸癌病人(P0004)顯著升高。經(jīng)單因素分析，胃癌病人血漿中miRNA199a3p的高表達(dá)與腫瘤漿膜侵犯(P0001)、N2—3淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P0014)和StageIII和IV(P=0003)顯著相關(guān)。并且，隨著胃癌TNM分期的進(jìn)展，血漿中miRNA199a3p的表達(dá)也相應(yīng)逐步升高。雖然胃癌病人血漿中miRNA1515p的表達(dá)也分別較健康對(duì)照者