纖維蛋白（原）及其降解產(chǎn)物對共培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞移行及黏附的影響.pdf

1、目的：觀察人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)/兔的平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cells，SMCs)共培養(yǎng)模型中不同濃度的纖維蛋白原(Fg)及其降解產(chǎn)物(Fb和FDPs)對HUVECs移行及對黏附分子1(Intercellular adhesion molecule.1，ICAM.1)表達(dá)的影響并探討其可能的影響機(jī)制。 方法：1.以Trans

2、well膜為載體，建立原代培養(yǎng)的HUVECs并與兔SMCs形成共培養(yǎng)體系，對兩種細(xì)胞的生長特性進(jìn)行觀察；2.應(yīng)用不同濃度的(0mg/ml、0.5 mg/ml、1.5 mg/ml、3.0 mg/ml、4.5 mg/ml和6.0 mg/m1)Fg,Fb和FDPs干預(yù)共培養(yǎng)體系，觀察HUVECs趨化(通過Transwell膜裝置)和遷移(通過細(xì)胞刮傷模型)現(xiàn)象；3.應(yīng)用0mg/ml、0.5 mg/ml、3.0 mg/ml和6.0 mg/mlf

3、g、Fb和FDPs，以及在上述亞組中加用I-κB拮抗劑BAYll-7082(濃度為20μM)或PKC拮抗劑Staurosporine(濃度為50nM)分別對共培養(yǎng)細(xì)胞模型進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)后分別從基因轉(zhuǎn)錄水平(Reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR法)和蛋白表達(dá)(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA法)水平檢測該模型中I-IUVEC

4、s ICAM．1表達(dá)情況。 結(jié)果：1.原代培養(yǎng)的HUVECsⅧ因子抗體免疫組化染色呈陽性。在共培養(yǎng)下HUVECs和SMCs在Transwll膜上生長良好，HUVECs單層生長，呈“鋪路石”樣外觀；SMCs多層生長，呈明顯的“峰谷”狀外觀。膜兩側(cè)的HUVECs和SMCs可以發(fā)生細(xì)胞連接。2．Fg組：中高濃度（≥3.0mg/m1)Fg呈濃度依賴性的促進(jìn)HUVECs的遷移和趨化，并能明顯上調(diào)ICAM-1的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，兩種拮抗劑均抑

5、制了ICAM-1的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，其中BAY11-7082在3.0mg/ml、6.0mg/ml抑制明顯，Staurosporine僅在3.0mg/ml時抑制效果明顯。Fb組：≥1.5mg/ml的Fb時呈濃度依賴性的使HUVECs的趨化和遷移數(shù)增加(P＜0.05)，在高濃度(6.0mg/ml)時促HUVECs ICAM-1mRNA水平和蛋白表達(dá)增加，兩種拮抗劑均可下調(diào)高濃度(6.0mg/ml)Fb的促ICAM-1表達(dá)作用。FDPs組：FD

6、Ps≥0.5mg/ml時HUVECs的趨化遷移數(shù)明顯增加(P＜0.05)，F(xiàn)DPs在高濃度(6.0mg/m1)時明顯促進(jìn)HUVECs ICAM-1在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的表達(dá)，兩種拮抗劑均可下調(diào)高濃度(6.0mg/m1)FDPs的促ICAM-1表達(dá)作用。 結(jié)論：1:成功培養(yǎng)出原代人HUVECs，利用Transwell膜成功建立了HUVECs/SMCs共培養(yǎng)體系，該模型能較好的模擬血管壁的結(jié)構(gòu)關(guān)系，為進(jìn)一步順利開展相關(guān)研究奠定了細(xì)胞模型