電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠凋亡蛋白Fas、Bcl-xL、P53的表達(dá)研究.pdf

1、目的：通過實(shí)驗(yàn)研究，驗(yàn)證電針（選用腎俞、膈俞、百會(huì)穴）治療血管性癡呆（VD）的療效，探討其治療作用機(jī)理。
　　 方法：
　　 第一部分電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠行為學(xué)的影響
　　 將健康雄性昆明小鼠隨機(jī)分為四組，假手術(shù)組、模型組、喜得鎮(zhèn)組、電針組。以阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈加尾部放血并重復(fù)腦缺血再灌注法復(fù)制模型，假手術(shù)組只行過程，不阻斷血流，尾部不放血。手術(shù)當(dāng)天動(dòng)物蘇醒后，進(jìn)行治療。電針組選取百會(huì)、腎俞、膈俞穴，毫針刺入

2、，接電針儀，連續(xù)波，頻率3次/秒。每次10min，每日1次。喜得鎮(zhèn)組灌胃喜得鎮(zhèn)0.77mg/kg/日。分別于治療后1天、7天，進(jìn)行卒中指數(shù)評(píng)分和神經(jīng)病癥評(píng)分；于治療后7天，進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)及電迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)學(xué)習(xí)成績(jī)，次日檢測(cè)記憶成績(jī)。
　　 第二部分電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠海馬及皮層神經(jīng)元凋亡的影響
　　 分組、造模及治療方法均同第一部分，分別于治療后1天、7天隨機(jī)取3只，將視交叉至乳頭體組織以4％多聚甲醛固定，

3、石蠟包埋，冠狀切片，厚5um，每隔2張取1張。進(jìn)行海馬及皮層神經(jīng)元原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)（TUNEL）。
　　 第三部分電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠大腦皮層Fas、Bcl-xL、P53的影響
　　 分組、造模及治療方法均同第一部分。分別于治療后1天、7天取腦，分離雙側(cè)大腦皮層，70％乙醇固定，制備單細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)皮層細(xì)胞Fas、Bcl-xL、P53蛋白表達(dá)。
　　 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析處理

4、。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠行為學(xué)的影響
　　 1、行為學(xué)評(píng)分結(jié)果
　　 術(shù)后1天，模型組卒中指數(shù)評(píng)分和神經(jīng)病癥評(píng)分明顯高于假手術(shù)組，電針治療可顯著降低行為學(xué)評(píng)分（P<0.01），而藥物喜得鎮(zhèn)對(duì)行為學(xué)評(píng)分無明顯改善（P>0.05）。術(shù)后7天，各組小鼠兩項(xiàng)行為學(xué)評(píng)分接近于假手術(shù)組，運(yùn)動(dòng)障礙完全恢復(fù)。
　　 2、學(xué)習(xí)、記憶成績(jī)檢測(cè)結(jié)果
　　 小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)成績(jī)

5、與記憶成績(jī)結(jié)果相似，模型組的游全程時(shí)間顯著延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加（均P<0.01），電針和喜得鎮(zhèn)治療均可縮短游全程時(shí)間，減少錯(cuò)誤次數(shù)（P<0.01），但均以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)成績(jī)與記憶成績(jī)結(jié)果相似，模型組反應(yīng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，潛伏期明顯縮短（均P<0.01）；電針和喜得鎮(zhèn)治療均可縮短反應(yīng)時(shí)間，延長(zhǎng)潛伏期（P<0.01），且以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 小鼠電迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)成績(jī)與記憶

6、成績(jī)結(jié)果相似，模型組反應(yīng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)顯著增加（均P<0.01）；電針和喜得鎮(zhèn)治療均可縮短反應(yīng)時(shí)間，減少錯(cuò)誤次數(shù)（P<0.01），且以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 第二部分電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠海馬及皮層神經(jīng)元凋亡的影響
　　 假手術(shù)組海馬CA1區(qū)和皮層均無凋亡陽(yáng)性細(xì)胞；術(shù)后1天，模型組可見凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，核固縮、呈棕黃色，神經(jīng)纖維排列紊亂；術(shù)后7天，海馬CA1區(qū)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，皮層可見大量凋亡細(xì)

7、胞，皮質(zhì)變薄，局限性神經(jīng)元丟失，呈篩網(wǎng)狀，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，膠質(zhì)細(xì)胞大量增生，出現(xiàn)梗塞灶；喜得鎮(zhèn)組、電針組僅出現(xiàn)少量或散在凋亡細(xì)胞。
　　 第三部分電針對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠大腦皮層Fas、Bcl-xL、P53的影響
　　 模型組術(shù)后1天，皮層Bcl-xL表達(dá)明顯下降（P<0.05），術(shù)后7天則顯著下降（P<0.01）。經(jīng)電針和喜得鎮(zhèn)治療1天和7天后，皮層Bcl-xL表達(dá)均明顯升高（均P<0.01），以電針作用為優(yōu)（P<0.

8、01）。
　　 模型組術(shù)后1天，皮層細(xì)胞Fas、P53表達(dá)明顯升高（P<0.01）。術(shù)后7天也明顯增高（P<0.01）。經(jīng)電針和喜得鎮(zhèn)治療1天和7天后，皮層細(xì)胞Fas、P53表達(dá)均顯著下降（均P<0.01），以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 電針腎俞、膈俞、百會(huì)穴對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠模型具有上調(diào)皮層神經(jīng)元Bcl-xL表達(dá)，下調(diào)Fas、P53表達(dá)，抑制皮層神經(jīng)元凋亡、促進(jìn)其損傷修復(fù)等作用，改善