人β-,2--糖蛋白I在Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)與鑒定.pdf

1、目的:探討β<,2>-糖蛋白I(β<,2>-glycoprotein I，β<,2>-GPI)基因在Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)。 方法:提取人正常肝臟組織的Total RNA，根據(jù)GeneBank(NM- 000042)報道的β<,2>-GPI的基因序列，通過RT-PCR擴(kuò)增β<,2>-GPI基因，將其克隆到供體質(zhì)粒pFastBacHTA中，通過。DHl0Bac菌篩選、鑒定并抽提獲得高純度的重組穿梭載體 Bac

2、-β<,2>-GPI，并脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組穿梭載體轉(zhuǎn)染SD細(xì)胞，獲取并擴(kuò)增重組病毒。提取轉(zhuǎn)染的昆蟲細(xì)胞的Total RNA，通過RT-PCR鑒定β<,2>-GPI基因在RNA水平的表達(dá)。 結(jié)果:1．構(gòu)建了攜帶β<,2>-GPI基因的重組供體質(zhì)粒pFastBac-β<,2>-GPI，經(jīng)雙酶切鑒定和序列分析證實β<,2>-GPI基因已正確插人供體質(zhì)粒的多克隆位點。2．構(gòu)建了攜帶β<,2>-GPI基因的重組穿梭載體。Bac-β<,2>-