尿微量蛋白壓電石英晶體免疫傳感器陣列的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立壓電石英晶體振蕩頻率檢測平臺，優(yōu)化影響液相中抗原抗體反應(yīng)效率的各項(xiàng)指標(biāo)，探討并建立壓電石英晶體蛋白傳感器反應(yīng)終點(diǎn)判斷方法，以此構(gòu)建壓電石英晶體尿蛋白免疫傳感器陣列，進(jìn)行臨床標(biāo)本的檢測并與傳統(tǒng)免疫比濁方法進(jìn)行方法學(xué)比較，探索臨床應(yīng)用的可行性。 方法：1.利用精細(xì)微加工法制作石英晶體，在其表面光刻金膜電極，比較不同電極厚度及直徑對檢測的影響，在此基礎(chǔ)上制備2×5型拔插式傳感器陣列。更換頻率計(jì)數(shù)卡，將檢測系統(tǒng)升級到支持win

2、dowsNT系列，增加溫控系統(tǒng)的功能，進(jìn)行雙電源互補(bǔ)供電、優(yōu)化PESAV2.0A版頻率記錄分析軟件，并以此構(gòu)建新型壓電石英晶體免疫傳感器陣列檢測平臺。 2.采用SPA法將抗人免疫球蛋白抗體固定于石英晶體表面。探索SPA法固定抗體的一致性和最佳抗體包被濃度，探討傳感器體系穩(wěn)定的最佳溫度—時間條件，PBS緩沖液pH值和離子強(qiáng)度對抗原抗體結(jié)合能力的影響。上述條件確定后，利用曲線擬合方法對傳感器反應(yīng)終點(diǎn)進(jìn)行判斷。并擬定判定標(biāo)準(zhǔn)。

3、 3.構(gòu)建人尿微量蛋白(α-1-微球蛋白、β-2-微球蛋白、微量白蛋白、IgG)免疫傳感器陣列檢測系統(tǒng)：觀察傳感器檢測的精密度與準(zhǔn)確度、線性范圍、非特異性反應(yīng)。繪制各項(xiàng)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線、進(jìn)行臨床標(biāo)本的檢測并與傳統(tǒng)免疫分析方法對比，探討檢測臨床標(biāo)本的可行性。 結(jié)果：1.AT切型、基頻10MHz、金膜電極直徑4.0mm、厚度100nm～150nm范圍石英晶體液相起振能力強(qiáng)、頻率穩(wěn)定、靈敏度高、質(zhì)量負(fù)載好，適合免疫反應(yīng)的檢測。

4、2.優(yōu)化后的免疫傳感器陣列在單個傳感器及陣列、溫控系統(tǒng)、PESAV2.0A頻率記錄分析軟件、電源系統(tǒng)等方面達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。 3.拔插式傳感器可有效解決傳感器在液相中頻率穩(wěn)定的難題，氣相頻率可達(dá)±1Hz、液相頻率可達(dá)±2Hz。 4.SPA法固定抗體操作簡單、省時，其固定抗體量的一致性較好。 5.構(gòu)建的壓電石英晶體免疫球蛋白免疫傳感器陣列在最適條件下，可在20min內(nèi)完成檢測。檢測的靈敏度、線性范圍、特異性與傳統(tǒng)免疫分

5、析方法相當(dāng)，對結(jié)果進(jìn)行回歸分析吻合性較好，提示所構(gòu)建的免疫傳感器陣列可用于臨床標(biāo)本的檢測。 結(jié)論：1.AT切型、基頻10MHz的石英晶體，金膜電極直徑4.0mm、厚度在100nm～150nm范圍內(nèi)最適用于壓電石英晶體免疫傳感器。 2.新型拔插式可調(diào)傳感器檢測池可有效解決傳感器在液相中頻率穩(wěn)定的難題。 3.新型石英晶體免疫傳感器檢測儀具有穩(wěn)定、實(shí)用的優(yōu)點(diǎn)，可用于多種免疫反應(yīng)的檢測。 4.SPA法是壓電石英晶