RNAi對(duì)晶體上皮細(xì)胞炎癥損傷模型中IKK-α及下游因子的抑制作用的研究.pdf

1、青島大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAi對(duì)晶體上皮細(xì)胞炎癥損傷模型中IKKα及下游因子的抑制作用的研究姓名：張晶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：趙桂秋20080601增加。在轉(zhuǎn)染混合物的組成為lOnMSiRNA與3OIl1HiPerFect2000時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高達(dá)706％，并且仍能保證80％的細(xì)胞存活率。3實(shí)時(shí)熒光定量PCR證實(shí)：設(shè)計(jì)并體外轉(zhuǎn)錄合成的3條IKKasiRNA轉(zhuǎn)染HLE—B3細(xì)胞后，有2條能夠使細(xì)胞IKK—QmRNA的表達(dá)明顯減

2、少，并且其中l(wèi)條的抑制作用可以達(dá)到82％。4定量PCR結(jié)果顯示：與『F常組比較，轉(zhuǎn)染24h后(即加入TNF—Q前)，siRNA組與TNFsiRNA組IKK—QmRNA的表達(dá)明顯減少，加入TNFQ后TNF組IKKQmRNA明顯增加，TNFsiRNA組雖有增加但仍低于正常細(xì)胞水平。雙抗體夾心法El。ISA結(jié)果顯示：各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞培養(yǎng)液中IKKQ蛋白、IL1B、TGF6的含量變化規(guī)律與IKKQmRNA的變化規(guī)律相一致。結(jié)論：1應(yīng)用rhTNFa

3、進(jìn)行刺激是建立HLE—B3細(xì)胞炎癥損傷模型的有效方法。2HLEB3細(xì)胞炎癥損傷模型中IKKQ被活化并表達(dá)增加，且該因子于胞漿、胞核中表達(dá)均呈陽性，IKKQ可能是外傷障中開啟炎癥損傷的關(guān)鍵因子。3經(jīng)過轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化，轉(zhuǎn)染試劑HiperFect2000能將siRNA高效的轉(zhuǎn)染進(jìn)HLE—B3細(xì)胞。4自行設(shè)計(jì)合成的IKKasiRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞后可以有效地實(shí)現(xiàn)對(duì)相應(yīng)的內(nèi)源性RNA的降解。5利用RNA干擾(RNAi)的方法可以有效的抑制TNFQ誘導(dǎo)