兔SAH腦血管痙攣后基底動脈中磷酸二酯酶V表達(dá)及活性變化的研究.pdf

1、目的:探討在小動物（如兔）SAH后CVS模型上經(jīng)股動脈入路行選擇性椎—基底動脈造影的可行性；探討TCD對兔SAH后CVS狀況的評價(jià)效度；探討兔CVS后不同時(shí)期基底動脈中磷酸二酯酶V的表達(dá)及活性變化，判斷其與腦血管痙攣的關(guān)系。 方法:通過“枕大池二次注血法”制成兔SAH后CVS模型，空白對照組于術(shù)前1天，實(shí)驗(yàn)對照組、SAH組于制模后第1天、3天、5天、7天、9天、11天行TCD與選擇性椎—基底動脈造影，通過測量基底動脈血流速度和血

2、管直徑，檢測兔腦血管痙攣的發(fā)生及變化，每次檢測完后，先行心臟灌注處死動物，然后開顱取其基底動脈，用于常規(guī)病理檢查及免疫組化的標(biāo)本直接投入10％的福爾馬林中，一周后制成病理切片，備做檢查。用于Real—time RT—PCR及活性測定的標(biāo)本則迅速置于液氮中冰凍，待硬結(jié)后置于—80℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆?。通過免疫組化、Real—Time RT—PCR檢測兔基底動脈中磷酸二酯酶Ⅴ的表達(dá)及量的變化，通過高效液相色譜法檢測其活性變化。 結(jié)果

3、:在家兔CVS動物模型上成功完成左側(cè)椎動脈選擇性插管和造影，可有效地判斷CVS的嚴(yán)重程度；采用TCD連續(xù)監(jiān)測基底動脈血流速度可獲得穩(wěn)定圖譜，能觀察到制模后血流速度的變化情況；正常兔經(jīng)DSA測得基底動脈管徑均值為0．82±0．08mm，經(jīng)TCD測得基底動脈平均血流速度（Vm）為27．39±6．25 cm/s，SAH組于二次注血后24小時(shí)即出現(xiàn)兔基底動脈管徑變細(xì)，顯影時(shí)間延遲，血流速度加快，上述現(xiàn)象于術(shù)后第3天達(dá)到高峰，一直持續(xù)至術(shù)后第7天

4、，此后逐漸緩解，至第11天時(shí)恢復(fù)正常。磷酸二酯酶Ⅴ在SAH組兔基底動脈中明顯表達(dá)，且其從術(shù)后24小時(shí)開始，含量增加，活性增強(qiáng)，第3—7天達(dá)高峰，此后逐漸降低，至第11天時(shí)基本恢復(fù)正常；空白對照組與實(shí)驗(yàn)對照組中兔基底動脈血管直徑和血流速度未見明顯變化，其上未見PDEV明顯表達(dá)，含量與活性也無變化。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)經(jīng)兔股動脈入路行選擇性椎—基底動脈造影是完全可行的，TCD可連續(xù)監(jiān)測兔基底動脈血流速度，對兔SAH后CVS狀況的評價(jià)穩(wěn)