華支睪吸蟲AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究.pdf

1、中山大學博士學位論文華支睪吸蟲AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究專業(yè)：姓名：導師：病原生物學楊光余新炳教授教授教授教授教授教授教授教授教授2005年4月25日廣州本項目獲廣東省自然科學團隊等基金資助華支墨吸蟲AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究中山大學博士學位論文乳酸脫氫酶廣泛分布在細菌、植物和動物之中。在脊椎動物中，乳酸脫氫酶是由四個亞單位組成的四聚體，其亞單位有3個獨立的基因座LDH—A。一B，一e基因所編碼。乳酸脫氫酶(

2、LDH)是糖代謝中的一個非常重要的酶，在NADH輔酶I存在的條件下能催化丙酮酸和乳酸之削相互轉化。乳酸脫氫酶的作用還有，在哺乳動物的過氧化物酶體中，LDH與B氧化系統(tǒng)相偶聯(lián)并與NADH的再氧化有關。糖代謝酶被認為是吸蟲生命能夠存活的關鍵分子，已經(jīng)被作為靶標進行疫苗研究的重要分子。從應用上講，乳酸脫氫酶在寄生蟲感染和一些疾病的診斷中有一定的意義。通過顯微鏡檢和臨床癥狀確診的病人或者復發(fā)感染瘧原蟲者，從其血液中可檢測到LDH的活性。在無脊椎

3、動物中，乳酸脫氫酶催化丙酮酸和乳酸之間相互轉化的特性研究還不深入。研究目的確定華支睪吸蟲AK3的cDNA和其編碼蛋白的分子特征包括：酶活性、最適pH、最適溫度、動力學參數(shù)、底物特異性、酶活性的抑制劑和其二級結構，了解華支睪吸蟲核苷酸代謝方面的特征。確定華支睪吸蟲LDH的cDNA和其編碼蛋白的分子特征、酶活性、最適pH、最適溫度、動力學參數(shù)、底物特異性、會屬離子對其活性的影響、酶抑制劑、二級結構、及蛋白結晶條件，了解華支睪吸蟲糖代謝方面的

4、特征。研究方法從華支睪成蟲的eDNA文庫中通過大規(guī)模測序克隆新基因，利用NCBl(http：／／wwwnlmnihgov／BLAST)網(wǎng)站的BLASTN，BLASTP去除序列中的載體部分并在DNA和氨基酸水平上進行同源性分析。開放讀碼框采用ORFfinder(http：／／wwwnlmnihgov／gorf／gorfhtml)程序預測。尋找完整閱讀框的起始密碼子和終止密碼子。蛋白分析用蛋白組學序列分析工具采用SWISS—MODELRep