系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者microRNA表達(dá)譜的鑒定及功能初探.pdf

1、目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種系統(tǒng)性自身免疫性疾病，其發(fā)病與Ⅰ型干擾素通路過(guò)度活化及固有免疫應(yīng)答異常密切相關(guān)。小RNA（microRNAs，miRNAs）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的能夠調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)的一組單鏈小分子RNA，在免疫系統(tǒng)各個(gè)方面都可發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本研究旨在鑒定SLE患者中miRNA基因的表達(dá)譜，尋找與SLE有相關(guān)性的miRNA基因，探索其在疾病中的作用及可能的作用機(jī)制。 方法：在中國(guó)漢族人群中，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶

2、鏈反應(yīng)（Real-time PCR）技術(shù)Taqman探針方法檢測(cè)156個(gè)成熟miRNAs在SLE和正常對(duì)照組間的表達(dá)差異。并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步擴(kuò)大樣本驗(yàn)證miR-146a的表達(dá)差異，同時(shí)結(jié)合臨床資料分析其與疾病表型的關(guān)系；使用Real-time PCR技術(shù)SYBR Green方法針對(duì)相同樣本檢測(cè)miR-146a靶基因IRAK1和TRAF6.及三個(gè)干擾素誘導(dǎo)基因Ly6E、MX1、OAS1mRNA的表達(dá)水平。體外運(yùn)用熒光報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)過(guò)表達(dá)mi

3、R-146a后對(duì)IRSE報(bào)告基因活性的影響。在SLE患者PBMC中過(guò)表達(dá)miR-146a后檢測(cè)其下游干擾素誘導(dǎo)基因mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：對(duì)156個(gè)成熟miRNAs的表達(dá)譜鑒定，發(fā)現(xiàn)包括miR-146a在內(nèi)的42個(gè)miRNAs在SLE患者中存在表達(dá)差異。進(jìn)一步擴(kuò)大樣本證實(shí)miR-146a的表達(dá)水平在SLE患者中顯著低于正常對(duì)照組（P<0.0001），且降低幅度與疾病活動(dòng)程度和腎臟損害程度呈負(fù)相關(guān)。miR-146a表達(dá)水平同時(shí)與

4、干擾素積分之間存在負(fù)性相關(guān)，體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-146a對(duì)Ⅰ型干擾素通路激活的影響，在HEK 293T和HeLa兩個(gè)細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)miR-146a后均可降低ISRE報(bào)告基因的活性（P<0.05）。miR-146a的兩個(gè)靶基因：IRAK1和TRAF6的表達(dá)水平在SLE患者組中顯著高于正常對(duì)照組（P=0.0002和P=0.0003），且與miR-146a表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。SLE患者PBMC中過(guò)表達(dá)miR-146a后干擾素誘導(dǎo)基因mRNA的表