農(nóng)桿菌介導(dǎo)柑橘指狀青霉遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化及其致病機(jī)理的初步研究.pdf

1、指狀青霉是造成柑橘果實(shí)采后損失最嚴(yán)重的病原菌。因此，研究其致病機(jī)理，有效防治指狀青霉引起的病害是很有必要的。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)指狀青霉轉(zhuǎn)化的體系進(jìn)行優(yōu)化，穩(wěn)定高效地獲得大量突變轉(zhuǎn)化子，建立指狀青霉突變體庫(kù)。同時(shí)，對(duì)已獲得的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行比較分析，獲得了一株不使柑橘果實(shí)發(fā)病的突變菌株，對(duì)該菌株進(jìn)行了分子分析（PCR分析、Tail-PCR分析、Southern blot等），找出T-DNA插入位點(diǎn)，通過(guò)RNAi技術(shù)探究突變位點(diǎn)的基因與指狀青

2、霉致病性的關(guān)系。主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的柑橘指狀青霉轉(zhuǎn)化條件:硝酸纖維素膜(NC膜)為承載膜，農(nóng)桿菌濃度OD600=0.6～0.8，指狀青霉孢子濃度為2×106CFU/ml，共培養(yǎng)時(shí)25℃恒溫培養(yǎng)48h。此時(shí)的轉(zhuǎn)化效率最高，能達(dá)到約20-50個(gè)轉(zhuǎn)化子/皿。建立了含有一千多個(gè)轉(zhuǎn)化子的指狀青霉突變體庫(kù)。
　　2.通過(guò)接種已獲得的轉(zhuǎn)化子于柑橘果實(shí)上，進(jìn)行對(duì)比分析，獲得了一株不使柑橘發(fā)病的菌株，通過(guò)South