CD2胞內(nèi)區(qū)結(jié)合蛋白的分子克隆及功能研究.pdf

1、CD2具有調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞成熟、分化、激活和凋亡等功能,是介導(dǎo)淋巴細(xì)胞信號(hào)傳遞和細(xì)胞間粘附作用的重要免疫分子.為了闡明CD2在細(xì)胞激活與凋亡中的重要作用及其免疫學(xué)意義,該論文進(jìn)行了以下幾個(gè)方面的作用:1、建立了酵母雙雜交系統(tǒng),以CD2分子胞內(nèi)區(qū)為釣餌,篩選了人T淋巴細(xì)胞KT3 cDNA文庫(kù),獲得了一個(gè)與CD2胞內(nèi)區(qū)結(jié)合的胞內(nèi)蛋白,命名為CD2cBP,此蛋白與v-fos轉(zhuǎn)化效應(yīng)蛋白(Fte-1)同源.2、利用免疫共沉淀法證明,在哺乳動(dòng)物細(xì)胞

2、內(nèi),CD2cBP特異地與CD2胞內(nèi)區(qū)結(jié)合.3、利用5'-RACE及RT-PCR方法證實(shí),人外周血淋巴細(xì)胞及Jurkat T淋巴細(xì)胞中均有CD2cBP和其同源蛋白Fte-1的表達(dá),并用RT-PCR方法獲得了人外周血淋巴細(xì)胞Fte-1的全長(zhǎng)cDNA,為進(jìn)一步比較和研究CD2cBP及Fte-1的功能打下基礎(chǔ).4、以佛波酯PMA激活內(nèi)源性PKC和從大鼠腦組織內(nèi)提取的外源性PKC分別從細(xì)胞內(nèi)、外兩個(gè)角度證明了PKC可使CD2cBP及其同源蛋白Ft

3、e-1磷酸化,該磷酸化作用可以被PKC的特異抑制劑抑制.5、利用綠色熒光蛋白與CD2cBP融合,觀察了CD2cBP在Jurkat T淋巴細(xì)胞內(nèi)的定位,發(fā)現(xiàn)CD2cBP在細(xì)胞胞漿內(nèi)均勻分布,在抗CD2單元克隆抗體刺激下,CD2cBP向胞膜內(nèi)側(cè)區(qū)域聚集,推測(cè)此趨向性變化有利于CD2cBP與CD2分子胞內(nèi)區(qū)結(jié)合,并可能與PKC磷酸化在關(guān).6、CD2cBP的功能研究表明,CD2cBP和Fte-1在Jurkat T淋巴細(xì)胞中過(guò)量表達(dá),顯著抑制抗C