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1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HPV16E6/E7對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)特性及其生長(zhǎng)調(diào)控因子的影響姓名:馬翠玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師:劉玉峰2000.5.1第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文H P V l 6 E 6 /E 7 基因?qū)θ私琴|(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)特性及其生長(zhǎng)調(diào)控因子的影響摘 要隊(duì)乳頭瘤病毒( H P V ) 是小D N A 病毒,主要感染人的上皮細(xì)胞,可誘導(dǎo)皮膚粘膜的多種增生性損傷,目前至少鑒定出有7 0 種以上H
2、P V 亞型,特定的H P V 亞型易感染特定的解剖部位。約有3 5型H P V 與生殖道感染有關(guān)且可通過性傳播。多數(shù)H P V 感染的結(jié)果是慢性的良性增生,少數(shù)類型與生殖器惡性腫瘤有關(guān),其中H P V l 6 型是與宮頸上皮內(nèi)腫瘤及鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)的最常見類型。H P V l 6 在體外可以引起小鼠成纖維細(xì)胞系的惡性轉(zhuǎn)化及人角質(zhì)形成細(xì)胞的永生化,但永生化細(xì)胞并無(wú)裸鼠致瘤性。H P V E 6 /E 7 基因在病毒轉(zhuǎn)化過程中起重要作用,E
3、 6 、E 7 可能通過分別與p 5 3 和p R b結(jié)合,改變其腫瘤抑制作用誘導(dǎo)細(xì)胞永生化,但是其它一些主要的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)基因也是E 6 、E 7 作用的目標(biāo),H P V E 6 /E 7 引起細(xì)胞永生化的機(jī)理仍然不清楚。有報(bào)道永生化細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白表達(dá)異常,但是正常細(xì)胞向永生化或惡性轉(zhuǎn)化過程中,尤其是病毒感染早期細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)改變的研究較少。H P V 體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞為研究病毒和細(xì)胞基因之間的相互作用機(jī)理以及細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)異常與癌變的
4、關(guān)系方面提供了一個(gè)理想模型。/為了探討H P V l 6 E 6 /E 7基因?qū)θ私琴|(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)及其調(diào)控因子的影響,我們從“H P V l 6 E 6 /E 7 轉(zhuǎn)染人角質(zhì)形成細(xì)胞”、“轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生物學(xué)特征觀察”和“H P V l 6 E 6 /E 7 對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)及其調(diào)控因子的影響”等方面進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。倍果顯示:、 1 .人角質(zhì)形成細(xì)胞感染表達(dá)H P V l 6 E 6 /E 7 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒后,形成G 4 1 8 抗性
5、克隆,通過傳代培養(yǎng)獲得多個(gè)能長(zhǎng)期培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞,其中來自三個(gè)轉(zhuǎn)化克隆的細(xì)胞體外培養(yǎng)2 0 代以上;2 .H P v l 6 E 6 /E 7 轉(zhuǎn)染的人角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)角蛋白、細(xì)胞間形成橋粒結(jié)構(gòu),證實(shí)其來源于表皮角質(zhì)形成細(xì)胞。經(jīng)細(xì)胞基因組S o u t h e r n 印跡分析證實(shí)E 6 /E 7 基因已整合至轉(zhuǎn)化的人角質(zhì)形成細(xì)胞中, 核酸原位雜交、W e s t e r n 印跡實(shí)驗(yàn)和H P V l 6 E 6 /E 7 抗原間.2
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