利用酵母雙雜交系統(tǒng)研究感病番茄品種中與Pto互作的基因.pdf

1、番茄細菌性斑點病是一種嚴重影響番茄質(zhì)量和產(chǎn)量的世界性細菌病害，是由丁香假單胞桿菌番茄致病變種[Pseudomonassyringaepv.tomato(Okabe)Young,Dye&Wilkie](PST)引起的。番茄中的抗病基因Pto與病原菌的無毒基因AvrPto互作是研究植物與病原物互作的典型模式系統(tǒng)。本文利用酵母雙雜交系統(tǒng)，從感病番茄品種“中蔬四號”中篩選與Pto互作的基因。 我們實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，感番茄細菌性斑點病的

2、番茄品種“中蔬四號”中存在與Pto完全一致的序列，為探討感病品種有抗病基因而不抗病的原因進行了本試驗。一方面能初步了解感病信號傳導(dǎo)途徑，另一方面也能了解植物—病原物互作的機理，進一步闡明抗感病機制。 本文(1)根據(jù)已知的蕃茄細菌性抗病基因Pto基因序列，合成了上下游引物，通過PCR擴增后，將獲得的目的片段構(gòu)建酵母誘餌表達載體pGBKT7-Pto，從而在酵母雙雜交系統(tǒng)中表達誘餌融合蛋白。(2)合成了感細菌性斑點病番茄品種“中蔬四號

3、”誘導(dǎo)表達的dscDNA，用以表達獵物文庫的融合蛋白。(3)將誘餌載體、dscDNA及獵物載體pGADT7-Rec共轉(zhuǎn)化到感受態(tài)的酵母細胞中，進行酵母雙雜交篩選，初步篩選到與Pto互作的陽性克隆36個，根據(jù)測序結(jié)果將其分為16類，有8類與植物中的相應(yīng)基因序列同源性較高，另外8類在Genbank中沒有找到與其同源的序列，為未知功能基因。對所測序列的結(jié)構(gòu)域及ORF進行分析，發(fā)現(xiàn)在這些克隆中有含有WD40，Transmembrane，PhBp