酵母雙雜交法對(duì)STK11羥基端互作蛋白的篩選.pdf

1、PJ綜合征(Peutz-Jeghers syndrome，PJS)是一種常染色體顯性遺傳疾病(OMIM，175200)，發(fā)病率約為1/8300—280000。其主要的臨床表現(xiàn)為胃腸道錯(cuò)構(gòu)瘤樣息肉、皮膚粘膜色素斑，故又稱之為黑斑息肉綜合征。本病患者的多種腫瘤易感性為其另一備受關(guān)注的主要原因。目前，PJS唯一被確認(rèn)的致病基因是STK11基因（又名LKB1基因），STK11/LKB1基因位于19p13.3，整個(gè)基因跨度23kb，cDNA全長(zhǎng)2

2、158bp，編碼區(qū)1302bp，有10個(gè)外顯子和11個(gè)內(nèi)含子。STKll/LKB1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與了個(gè)體胚胎發(fā)育及細(xì)胞極化等重要生命活動(dòng)的調(diào)控，在抑制腫瘤細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝等方面亦發(fā)揮了重要作用，并與P53、Wnt及AMPK等多種信號(hào)系統(tǒng)相關(guān)。其表達(dá)豐度在個(gè)體發(fā)育的不同階段存在組織與時(shí)相差異性。
　　 STK11/LKB1基因大部分的致病性突變與其催化活性域的突變致使的STKII/LKBI激酶功能喪失相

3、關(guān)，但是許多報(bào)道證實(shí)在部分PJS病人和散發(fā)腫瘤患者中，也存在STK11/LKB1羧基端的突變。STK11/LKB1羧基端非催化區(qū)是由8、9號(hào)外顯子編碼的，包括了309-433氨基酸，由124個(gè)殘基組成的。羧基端非催化調(diào)節(jié)區(qū)域包含了異戊烯化基序。目前己驗(yàn)證STK11/LKBI羧基端有五個(gè)磷酸化位點(diǎn)：兩個(gè)殘基是自磷酸化位點(diǎn)(Thr336和Thr402)，其他三個(gè)是被上游激酶磷酸化的位點(diǎn)(Ser325，Thr363，Ser428)。有研究發(fā)現(xiàn)

4、：過(guò)表達(dá)STK11/LKBi羧基斌可以干擾STKll/LKBI的功能，表跟STK11/LKBl羧基端具有重要的調(diào)節(jié)作用，可能通過(guò)與下游的蛋白質(zhì)相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)其調(diào)節(jié)功能，其羧基端突變可能影響了這種結(jié)合能力。
　　 本研究利用Clontech公司的第四代酵母雙雜交系統(tǒng)MatchmakerTM Gold Yeast Two-Hybrid System初步篩查出STK11/LKB1羧基端的互作蛋白PGM1（葡萄糖磷酸變位酶1），為后續(xù)的