生孢噬纖維菌的分離鑒定及胞外多糖的免疫作用的研究.pdf

1、本研究采用雙層平板與濾紙平板相結(jié)合，從土壤中篩選到能強(qiáng)烈分解纖維素的好氧性黃色菌株，結(jié)合形態(tài)學(xué)特性、生理生化特征初步鑒定該菌為生孢噬纖維菌，命名為生孢噬纖維細(xì)菌JL-02(SporocytoPhagaJL-02)菌株。 JL-02(SporocytoPhagaJL-02)菌株能降解纖維素合成胞外多糖，培養(yǎng)七天有81.5﹪的纖維素濾紙被降解，但只測(cè)得極低的纖維素酶活，該菌可能存在特殊的纖維素降解機(jī)制。采用發(fā)酵法制備胞外多糖，并用乙

2、醇沉淀的方法得到胞外多糖粗品，1ml樣品液中多糖含量為0.172mg；Clayton培養(yǎng)基是制備胞外多糖的較好的培養(yǎng)基；經(jīng)草魚(yú)急性毒性實(shí)驗(yàn)確定JL-02菌株及其胞外粗品多糖對(duì)草魚(yú)毒性較低或無(wú)毒，當(dāng)腹腔注射濃度為3.2mg/ml時(shí)，致死率為10﹪，等于或低于1.6mg/ml時(shí)對(duì)草魚(yú)無(wú)毒性。 按每kg飼料加0、50mg、100mg、150mg多糖粗品飼喂草魚(yú)證實(shí)有免疫促進(jìn)作用：50mg組受免草魚(yú)的NBT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量分別為43.80±

3、1.90、44.9±2.54、43.90±1.87；100mg劑量的分別為85.47±3.48、88.8±3.21、87.80±3.94；150mg劑量的為79.83±3.6、85.6±2.20、84.43±2.67。所有試驗(yàn)組數(shù)據(jù)極顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.01)，其中100mg組NBT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量最高；劑量為50mg時(shí)，受免草魚(yú)的溶菌酶活力分別為0.108±0.007、0.13±0.01、0.122±0.009；100mg劑量的分

4、別為0.176±0.019、0.193±0.01、0.189±0.0068；150mg劑量的為0.166±0.062、0.182±0.008、0.176±0.006；所有試驗(yàn)組的溶菌酶活力均高于空白對(duì)照組(P＜0.05)；所有試驗(yàn)組抗菌活力值較對(duì)照組就有不同程度的提高，一直持續(xù)到第36天。其中150mg組上升最快，24天時(shí)血清抗菌活力達(dá)到峰值；各實(shí)驗(yàn)組的白細(xì)胞的吞噬百分比和吞噬指數(shù)都比對(duì)照組高，其中以100mg組的白細(xì)胞的吞噬百分比和吞

5、噬指數(shù)最高；實(shí)驗(yàn)組魚(yú)體增重和相對(duì)生長(zhǎng)速率都極顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.01)；隨著多糖用量增加，實(shí)驗(yàn)魚(yú)增重量和相對(duì)生長(zhǎng)速率出現(xiàn)遞增，用量為100mg時(shí)，魚(yú)體的增重和相對(duì)生長(zhǎng)速率達(dá)最大值，用量為150mg/kg時(shí)，抑制魚(yú)生長(zhǎng)；經(jīng)嗜水氣單胞菌攻毒后，對(duì)照組死亡率達(dá)到53.3﹪，試驗(yàn)組死亡率較低，免疫保護(hù)率依次達(dá)到25﹪，50﹪，37.5﹪。 對(duì)草魚(yú)的非特異性免疫、相對(duì)生長(zhǎng)速率、成活率的影響結(jié)果綜合分析，生孢噬纖維細(xì)菌胞外多糖可被用