二甲基亞砜對P19細胞向心肌細胞分化的影響及分化后NADPH氧化酶表達的變化.pdf

1、目的：①體外探討不同濃度的二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）對誘導P19細胞向心肌細胞分化的影響；②研究 P19細胞體外向心肌細胞分化后細胞內(nèi)NADPH氧化酶水平的改變。
　　方法：①原代生長的P19細胞予以α-MEM完全培養(yǎng)液（含90％α-MEM、10%FBS、青霉素100u/ml、鏈霉素100ug/ml）培養(yǎng)。選取合適的該細胞株，予以適當濃度的胰酶處理后，以約1×106個/ml的細胞密度轉移到10 c

2、m大小的懸浮生長培養(yǎng)皿，加入不同濃度誘導培養(yǎng)液10 ml（分別含0.4%，0.9%及1.4% DMSO的完全培養(yǎng)液），懸浮培養(yǎng)。第3天以7 ml的上述誘導培養(yǎng)液進行不完全換液。第4天待培養(yǎng)皿內(nèi)有大量細胞聚集體形成時，取6 cm大小組織培養(yǎng)皿，吸取適量該細胞聚集體轉入其中使其貼壁生長，后以完全培養(yǎng)液每兩天換液一次，培養(yǎng)至13天，在顯微鏡下觀察不同生長時期的細胞形態(tài)。收集各組不同誘導時間的細胞，行Western Blot檢測細胞內(nèi)肌鈣蛋白

3、I(cTnI)的表達情況，以確定其向心肌細胞的分化；對各組相同分化時間的P19細胞行Western Blot比較cTnI蛋白的表達，以比較分化的程度；②行Western Blot檢測P19細胞向心肌細胞分化前后細胞內(nèi)NADPH氧化酶的兩個亞基p22-phox以及gp91-phox水平的變化；③應用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計分析，cTnI蛋白水平及分化前后細胞內(nèi)p22-phox及gp91-phox蛋白水平的比較采用t檢驗，Western

4、 blot結果目的條帶應用軟件Image J進行灰度值計算，檢驗水準取P=0.05。
　　結果：①P19細胞經(jīng)0.4%DMSO誘導分化，于第9天開始檢測到cTnI表達陽性，第11天cTnI表達高于第9天，同時第13天也高于第11天；經(jīng)0.9%DMSO誘導分化，于第7天開始檢測到cTnI表達陽性，第9天cTnI表達高于第7天，同時第11天高于第9天，第13天也高于第11天，上述差異均具統(tǒng)計意義（P<0.05）；1.4%DMSO處理的

5、P19細胞于誘導第三天大量凋亡，未能誘導成功。②分別經(jīng)0.4%DMSO和0.9% DMSO誘導的P19細胞，分化相同時間后者較前者cTnI表達高，差異具統(tǒng)計意義（P<0.05）。③P19細胞向心肌細胞分化后細胞內(nèi) p22-phox及gp91-phox蛋白水平較分化前高，差異具統(tǒng)計意義（P<0.05）。
　　結論：DMSO在一定條件下可誘導P19細胞在體外向心肌細胞分化；DMSO的誘導作用在一定范圍內(nèi)與其濃度成正相關，然而濃度過高可