羊膜軟組織填充材料對神經卡壓松解術后作用的實驗研究.pdf

1、目的:通過建立SD大鼠坐骨神經慢性卡壓模型，研究羊膜軟組織填充材料對神經卡壓松解術后的作用及影響。通過觀察相應的指標，判斷該材料能否有效預防卡壓段神經與周圍組織粘連及促進神經再生。
　　 方法:1實驗分組:取成年雌性SD大鼠64只，體重250-300克，隨機分為2組，每組32只。A組為對照組，單純解除卡壓;B組為實驗組，解除卡壓后應用羊膜軟組織填充材料包裹卡壓部位。2動物模型:采用Mackinnon所設計的大白鼠坐骨神經慢性卡壓

2、模型，卡壓2周后采用兩種不同的處理方法進行實驗研究。3手術方法:將實驗動物稱重后，腹腔內麻醉，術區(qū)備皮，俯臥位固定，消毒，鋪單，于單側（右側）股后外側做平行于股骨干的切口，長度約2.5cm，暴露坐骨神經，用游標卡尺測量其直徑（平均為1.25mm）。選用內徑為1.2mm的硅膠管，取0.5cm長，縱行剖開后套在離梨狀肌下緣約1.0cm處的坐骨神經上，用7-0無創(chuàng)傷縫線縫合硅膠管2針，注意勿將硅膠管與神經縫合到一處，生理鹽水沖洗后滴入慶大霉素

3、注射液0.4ml，預防感染。縫合肌層及皮膚，切口碘伏涂搽后，不覆蓋任何輔料，置于飼養(yǎng)籠中自然蘇醒。術后不制動，任其自由活動。常規(guī)飼養(yǎng)兩周后，行肌電圖檢查，證實神經傳導速度下降，A、B兩組按上述術式行2次手術。4檢測方法及指標:(1)大體觀察:觀察大鼠切口愈合情況，排異反應（術后創(chuàng)面腫脹、炎癥等局部癥狀），有無足底潰瘍形成及自噬現象，行動時是否有跛行現象以及術后恢復情況;觀察大鼠的毛色改變及小腿肌肉萎縮情況，羊膜軟組織填充材料吸收情況;卡

4、壓段神經直徑大小、外膜厚度的變化;神經與局部組織粘連情況，分離神經時滲血及神經活動度等情況。(2)神經電生理測定:術后2、4、6、8周兩組各隨機抓取8只大鼠行雙側坐骨神經肌電圖檢查，在相同的刺激頻率(1HZ)和持續(xù)時間(0.02ms)下，測得坐骨神經的神經傳導速度(MNCV)、復合肌肉動作電位(CMAP)波幅以及末梢潛伏期，在健側坐骨神經相同位置亦測定相同指標。計算術側坐骨神經CMAP波幅及末梢潛伏期占正常側的百分比，即術側坐骨神經CM

5、AP波幅恢復比和末梢潛伏期延遲比。(3)組織學觀察:包括光鏡和電鏡觀察。術后4周、8周（取4只）標本用10％福爾馬林固定24小時后，脫水，石蠟包埋，切片，干燥后行HE染色，然后在光鏡下觀察變性的神經纖維數量、髓鞘的厚度以及束間結締組織與血管的增生狀況等;術后8周（剩余4只）標本在電鏡下觀察神經髓鞘的厚度及其板層的結構、神經軸索直徑、雪旺氏細胞(Schwanncell，SC)、微絲、微管、線粒體等超微結構變化。(4)三頭肌濕重恢復率:神經

6、電生理檢查結束后，從小腿三頭肌肌肉起止點處取下雙側三頭肌，剝離掉肌肉表面的脂肪和筋膜，用分析天平（萬分之一）稱重，記錄結果，并計算出三頭肌濕重恢復率，即術側肌肉濕重相對于健側肌肉濕重的百分比。5、統(tǒng)計學處理:應用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數±標準差((X)±S)表示，兩組均數間的比較采用兩樣本t檢驗;推斷等級資料的兩個獨立樣本所來自的兩個總體分布位置是否有差別，采用兩個獨立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗。檢驗

7、水準α=0.05。
　　 結果:1大體觀察:實驗動物切口全部Ⅰ期愈合，無一例感染發(fā)生，無紅腫等炎癥表現，無自噬及足趾脫落現象發(fā)生。神經卡壓2周后右下肢毛色發(fā)黃，光澤度降低，足趾主動伸展功能受限，并出現跛行，小腿后群肌肉萎縮明顯，但無足底潰瘍發(fā)生。去除卡壓物后，可見卡壓段神經顏色較蒼白，質地較硬，直徑明顯變細，外膜增厚，卡壓處遠、近端神經增粗明顯，呈神經瘤樣改變。松解術后，隨著時間的延長，兩組神經增粗段逐漸變細，卡壓段神經逐漸增粗

8、，神經外膜亦逐漸變薄，直至接近正常。取材時羊膜軟組織填充材料吸收不明顯，至8周時仍有存留。與對照組相比，實驗組動物坐骨神經在各時間段與局部組織粘連較輕，容易鈍性分離，分離神經時滲血較少，神經活動度也較好(P＜0.05，秩和檢驗)。2神經電生理測定:模型卡壓2周后，術側坐骨神經神經傳導速度平均為11.65±1.00m/s。兩組在松解術后神經傳導速度、復合肌肉動作電位波幅以及末梢潛伏期均有不同程度恢復，但均未恢復至正常值。實驗組MNCV、C

9、MAP波幅恢復比和末梢潛伏期延遲比均比對照組恢復得好(P＜0.05，t檢驗)。至第8周時，實驗組神經傳導速度達到45.16±1.91m/s，而對照組神經傳導速度僅達到32.60±3.57m/s;復合肌肉動作電位波幅恢復比:實驗組為83.89±1.94(％)，對照組為61.96±2.69(％);末梢潛伏期延遲比:實驗組為1.30±0.06對照組為1.48±0.06。3組織學觀察。光鏡下觀察:與對照組相比，實驗組表現為有髓神經纖維數目較多，

10、且較粗大的神經纖維數量比例較高，髓鞘也較厚，變性的神經纖維數目較少，結締組織增生較輕，血運也較豐富。術后8周對照組變性的神經纖維數目(28.6±1.4)與實驗組(23.9±1.2)相比，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。電鏡下觀察:術后8周對照組可見再生的有髓神經纖維較多，軸索較細，排列較規(guī)則，髓鞘增生不規(guī)則，厚薄不均，甚則變形、分層，部分髓鞘腫脹、溶合明顯，仍可見到髓鞘局限性塌陷和脫落現象，偶可見到線粒體髓樣化，結締組織增生仍比較明顯

11、;實驗組表現為有髓纖維再生顯著，排列規(guī)則，呈束狀成長，髓鞘明顯增厚，厚薄較一致，板層結構較清晰，髓鞘輕度腫脹，未見到髓鞘塌陷、脫落現象，軸索直徑較大，結締組織增生不明顯，時可見到雪旺氏細胞、線粒體、微絲、微管等。4三頭肌濕重恢復率:術后各時間段，實驗組三頭肌濕重恢復率均較對照組為好(P＜0.05，t檢驗)。至第8周時，實驗組已達90.55±4.03(％)對照組僅為79.53±4.01(％)。
　　 結論:1羊膜軟組織填充材料應用