鼻息肉中LIVIN,SMAC及MCM3的表達(dá)及其與臨床分型分期和復(fù)發(fā)率的相關(guān)性分析.pdf

1、研究背景及目的:鼻息肉(NasalPolyps，NP)是一種常見(jiàn)的鼻科增生性疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今沒(méi)有真正闡明。自從內(nèi)窺鏡手術(shù)廣泛開(kāi)展以來(lái)，其術(shù)后復(fù)發(fā)率已明顯降低。但部分鼻息肉，如“鼻息肉病”，其手術(shù)后的復(fù)發(fā)率始終較高。有些患者往往在經(jīng)歷多次手術(shù)以及長(zhǎng)期使用局部皮質(zhì)類固醇激素噴鼻劑，甚至部分患者須服用較長(zhǎng)時(shí)間的低劑量激素口服制劑后，仍然會(huì)再次復(fù)發(fā)息肉，大大增加了患者的痛苦及思想與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
　　 對(duì)此類鼻息肉患者個(gè)體的預(yù)后，

2、目前幾乎完全依賴鼻科醫(yī)師的臨床經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行主觀判斷，尚無(wú)廣泛認(rèn)可的具有臨床參考價(jià)值的客觀指標(biāo)。近年來(lái)，在鼻息肉發(fā)病機(jī)制中關(guān)于細(xì)胞凋亡方面的研究正在逐步增加。目前已做了一些卓有成效的工作。特別是在腺體促增殖/抑增殖或促凋亡/抑凋亡因素的動(dòng)態(tài)平衡方面、息肉上皮、息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞等方面均取得一些成果。目前研究結(jié)果初步認(rèn)為鼻息肉上皮細(xì)胞有顯著的增殖特性;凋亡基因/抑凋亡基因失衡，使細(xì)胞凋亡受抑制是鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞數(shù)增多的重要因素之一。

3、r>　　 Livin是IAPs(inhibitorsofapoptosisproteins，IAPs)蛋白家族的新成員，有BIR和RING鋅指結(jié)構(gòu)域，能夠與Caspases蛋白結(jié)合，抑制其介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。它在大多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)、在一些腫瘤及增殖性病變細(xì)胞中有高表達(dá)。Caspases蛋白在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡中處于重要地位，大多數(shù)的刺激性信號(hào)是經(jīng)由Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，激活并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的。Livin與其中多個(gè)成員相互作用，抑制細(xì)胞凋

4、亡的執(zhí)行，例如，Livin可結(jié)合caspase-9的前體蛋白及其激活的形式，從而抑制其功能。
　　 Smac/DIABLO是一個(gè)促進(jìn)凋亡的重要相關(guān)蛋白，具有239-氨基酸殘基，一般定位于線粒體的膜間隙。當(dāng)?shù)蛲鲂盘?hào)刺激Smac/DIABLO時(shí)，Smac會(huì)伴隨著細(xì)胞色素c的釋放進(jìn)入胞漿，成熟的Smac在離開(kāi)線粒體后，可與XIAP、Livin等IAPs家族成員鋅指結(jié)構(gòu)域BIR3上的表面溝結(jié)合，而這個(gè)溝是用于結(jié)合caspase9的部位，

5、因而Smac能競(jìng)爭(zhēng)性去除IAPs對(duì)凋亡的抑制，從而進(jìn)一步激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 Mcm3，即微小染色體維持蛋白3，作為Mcms家族中重要的一員，與生物體DNA復(fù)制過(guò)程密切相關(guān)。MCMs家族目前有7種。微小染色體是指酵母中一系列核小體被包裝后形成的結(jié)構(gòu)，是酵母復(fù)制的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　 同經(jīng)典的增殖性標(biāo)記物Ki-67相比，兩者雖都定位于增殖細(xì)胞中。只有Mcm3能夠在相當(dāng)數(shù)量的處于生長(zhǎng)靜止期的細(xì)胞中

6、表達(dá)陽(yáng)性，而Ki-67無(wú)表達(dá)，可以認(rèn)為Mcm3作為一種細(xì)胞增殖標(biāo)記物，較Ki-67更有意義。
　　 目前關(guān)于Livin，Smac和Mcm3在NP中表達(dá)的相關(guān)研究很少。三者聯(lián)合檢測(cè)分析，并與NP臨床分型分期和術(shù)后復(fù)發(fā)率之間做相關(guān)性研究，指導(dǎo)耳鼻喉科醫(yī)師制定更加適宜的個(gè)體化手術(shù)治療及隨訪方案，在國(guó)內(nèi)外目前的檢索文件中尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本文主要研究目的在于:(1)通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)3種典型的細(xì)胞凋亡/增殖相關(guān)因子:Livin，Sm

7、ac和Mcm3在NP的表達(dá)特點(diǎn)，進(jìn)一步探索NP在細(xì)胞凋亡途徑可能的發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步闡明細(xì)胞凋亡機(jī)制在NP的發(fā)生、發(fā)展中的重要作用，具有較強(qiáng)的理論意義。(2)并通過(guò)對(duì)上述3種細(xì)胞凋亡/增殖因子的表達(dá)水平與NP臨床分型分期及術(shù)后復(fù)發(fā)率進(jìn)行相關(guān)性分析，探索一條能較為客觀科學(xué)地預(yù)測(cè)NP患者術(shù)后復(fù)發(fā)可能性的分子水平途徑，可作為臨床參考指標(biāo)，與鼻科醫(yī)師的臨床經(jīng)驗(yàn)性判斷互為補(bǔ)充，用于指導(dǎo)耳鼻喉科醫(yī)生對(duì)NP患者在手術(shù)治療、圍手術(shù)期處理以及隨訪等方面進(jìn)

8、行個(gè)體化的制定，以改善目前主要憑醫(yī)師臨床經(jīng)驗(yàn)做出判斷的現(xiàn)狀，有效減少?gòu)?fù)發(fā)，具備實(shí)際的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法:于山東大學(xué)第二醫(yī)院病理科檢驗(yàn)并保存的2005年6月～2009年6月期間入院的單純鼻息肉患者蠟塊中隨機(jī)選取80例，男性52例，女性28例，平均年齡34.5歲（19～57歲），臨床分型分期為Ⅱ型Ⅰ期24例，Ⅱ型Ⅱ期26例，Ⅱ型Ⅲ期16例，Ⅲ型14例。均病理確診為鼻息肉.通過(guò)詳細(xì)詢問(wèn)病史、臨床癥狀、鼻內(nèi)窺鏡檢查、變應(yīng)原皮膚試

9、驗(yàn)（參照2008年WHO制定的《過(guò)敏性鼻炎的處理及其對(duì)哮喘的影響》以及中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組制定的2008年《支氣管哮喘防治指南》），均排除變應(yīng)性鼻炎、哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病史。80例患者隨訪復(fù)查期均超過(guò)12個(gè)月。隨訪期內(nèi)經(jīng)病理證實(shí)復(fù)發(fā)者（所有復(fù)發(fā)患者均首先在鼻內(nèi)窺鏡復(fù)查時(shí)發(fā)現(xiàn)息肉樣新生物，向患者講明目前病情并由本人簽署我院特殊檢查治療知情同意書(shū)后，然后行內(nèi)窺鏡下鼻息肉清理并送病理科再次診斷），Ⅱ型Ⅰ期2例，Ⅱ型Ⅱ期6例，Ⅱ型Ⅲ期

10、6例，Ⅲ型8例。
　　 正常對(duì)照組:12例，取自2008年5月～2009年12月間我院外傷性腦脊液鼻漏患者手術(shù)修補(bǔ)過(guò)程中，為正常鉤突粘膜，均排除鼻-鼻竇炎及變應(yīng)性鼻炎、哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病史（排除方法同鼻息肉組，并結(jié)合鼻竇CT）。
　　 通過(guò)免疫組化SP方法，檢測(cè)標(biāo)本組織中Livin，Smac及Mcm3的表達(dá)，以胞漿和/或胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)，應(yīng)用Olympus顯微鏡和Micro-image圖像處理系統(tǒng)

11、，每例標(biāo)本選取3張切片，每張切片均采用雙盲法隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野（顯微鏡下×400），用半定量積分法判斷結(jié)果，所有數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果:80例標(biāo)本中，Livin表達(dá)陽(yáng)性片為54例，陽(yáng)性率為66.7％(54/80)，主要表達(dá)在息肉組織內(nèi)增生的腺體/腺管上皮細(xì)胞，定位于胞漿;對(duì)照組12例正常粘膜無(wú)1例陽(yáng)性(0/12)。Mcm3表達(dá)陽(yáng)性片為46例，陽(yáng)性率為56.7％(46/80)，主要表達(dá)在息肉上皮細(xì)胞，定位于胞核。對(duì)照組

12、正常粘膜4例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為33.3％(4/12)，定位于粘膜上皮細(xì)胞的胞核。Smac表達(dá)陽(yáng)性為42例，陽(yáng)性率為52.5％(42/80)，主要表達(dá)在息肉上皮細(xì)胞，部分腺體上皮亦可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，定位于胞漿。對(duì)照組正常粘膜11例陽(yáng)性，陽(yáng)性率91.7％(11/12)，主要表達(dá)在粘膜上皮細(xì)胞，定位于胞漿。Livin，Smac在鼻息肉與正常粘膜對(duì)照組之間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Mcm3在鼻息肉與正常粘膜對(duì)照組之間的表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)

13、學(xué)意義(P＞0.05)。Livin，Smac表達(dá)強(qiáng)度在鼻息肉不同臨床分型分期之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P＜0.05)，可以認(rèn)為鼻息肉不同臨床分型分期中Livin,Smac表達(dá)強(qiáng)度是不同的。Mcm3表達(dá)強(qiáng)度在鼻息肉不同臨床分型分期之間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P＞0.05)。Livin、Mcm3聯(lián)合表達(dá)強(qiáng)度與鼻息肉臨床分型分期之間呈正相關(guān)關(guān)系(R's=0.453，P＜0.05);而Smac表達(dá)強(qiáng)度與鼻息肉臨床分型分期之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（R's=-

14、0.429，P＜0.05）。Livin、Mcm3聯(lián)合表達(dá)強(qiáng)度與鼻息肉術(shù)后復(fù)發(fā)率之間呈直線正相關(guān)關(guān)系(R=0.9569，P＜0.05);而Smac表達(dá)強(qiáng)度與鼻息肉術(shù)后復(fù)發(fā)率之間呈直線負(fù)相關(guān)關(guān)系（R=-0.9781，P＜0.05）。
　　 結(jié)論:(1)Livin過(guò)度表達(dá)可能在鼻息肉內(nèi)腺體發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中具有重要作用。(2)鼻息肉中存在明顯的Smac表達(dá)受阻。(3)Mcm3標(biāo)志的鼻息肉細(xì)胞增殖活性的提高在其發(fā)病機(jī)制中可能處于一個(gè)相對(duì)次