根除幽門螺桿菌對非腫瘤胃黏膜E-鈣黏蛋白、死亡相關(guān)蛋白激酶基因啟動子CpG島甲基化的影響.pdf

1、目的：觀察根除幽門螺桿菌(Hp)對非腫瘤胃黏膜E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)基因啟動子CpG島甲基化的影響,及E-cadherin、DAPK基因啟動子CpG島甲基化狀態(tài)和蛋白表達水平,從而從基因及蛋白兩個水平上探討胃癌發(fā)病的可能機制及根除Hp治療在預防胃癌發(fā)生中的意義。
　　方法：收集因消化不良癥狀就診于安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院門診行胃鏡及快速尿素酶試驗(RUT)檢查為Hp陽性的慢性胃炎患者的內(nèi)

2、鏡下胃黏膜組織,留作DNA水平及病理學組織檢測,記錄患者的臨床及病理資料。Hp陽性者給予標準三聯(lián)療法(埃索美拉唑20mg、阿莫西林1.0g、克拉霉素0.5g,均為每天2次,EAC方案)根除Hp,療程10天,停藥4周后行14C尿素呼氣試驗(14C-UBT)檢查明確Hp根除情況。Hp成功根除患者隨訪6個月,再次留取胃黏膜組織。選擇符合RUT和組織嗜銀染色(W-S)法雙陽性且Hp成功根除的慢性胃炎患者作為研究對象,符合RUT和W-S法雙陰性慢

3、性胃炎患者作為對照。采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)法檢測Hp感染、Hp感染陰性及Hp根除前后E-cadherin、DAPK基因啟動子CpG島甲基化狀態(tài),并分析其與臨床病理特征的關(guān)系,將其中的陽性結(jié)果克隆并測序以驗證MSP擴增的準確性;采用免疫組化法(IHC)檢測E-cadherin、DAPK蛋白表達水平。
　　結(jié)果：1.符合RUT及W-S法雙陽性Hp感染的慢性胃炎患者67例,RUT及W-S法雙陰性Hp感染陰性的慢性胃炎患者

4、41例,單一RUT及W-S法陽性者共7例視為Hp感染可疑予以剔除。成功根除60例,根除率89.55％(60/67),其中慢性淺表性胃炎(CSG)21例,慢性胃炎伴萎縮(CAG)13例,伴腸化(IM)15例,伴異型增生(DYS)11例。6個月后隨訪到31例,均成功留取了胃黏膜組織。2.Hp感染患者胃黏膜E-cadherin基因啟動子CpG島甲基化陽性率明顯高于Hp感染陰性患者(45%對9.8%,P<0.001),Hp感染患者胃黏膜DAPK

5、基因啟動子CpG島甲基化陽性率略高于Hp感染陰性患者(50%對43.9%,P>0.05)。3.E-cadherin基因啟動子CpG島甲基化的慢性炎癥評分明顯高于非甲基化慢性炎癥評分(2.16對1.6,P=0.017),DAPK基因啟動子CpG島甲基化的慢性炎癥評分略高于非甲基化慢性炎癥評分(1.96對1.61,P=0.093)。4.單因素發(fā)現(xiàn)胃黏膜E-cadherin基因啟動子CpG島甲基化與慢性炎癥、Hp相關(guān)(P=0.004,P=0.

6、001),Logistic回歸表明Hp感染是E-cadherin基因啟動子CpG島甲基化的唯一影響因素[優(yōu)勢比(OR值)7.568,95%置信區(qū)間(CI)2.396-23.906,P=0.001],與患者性別、年齡、抽煙、喝酒、胃癌家族史等無相關(guān)性。5.E-cadherin基因啟動子CpG島甲基化水平在Hp根除后明顯低于Hp根除前(12.9%對45.16%,P=0.017),DAPK基因啟動子CpG島甲基化水平在Hp根除后低于Hp根除前

7、(22.6%對51.6%,P=0.134)。6.免疫組化顯示E-cadherin、DAPK蛋白表達水平從慢性萎縮性胃炎到腸化到異型增生有逐步下降趨勢(P>0.05)。在E-cadherin、DAPK基因甲基化檢測陽性的患者中存在E-cadherin、DAPK蛋白表達下調(diào)。
　　結(jié)論：1.Hp感染的非腫瘤胃黏膜組織E-cadherin基因啟動子CpG島甲基化陽性率明顯高于Hp感染陰性組織,且Hp感染是E-cadherin基因啟動子C