三種蜘蛛毒素抗弓形蟲藥物的篩選及其作用機(jī)制的初探.pdf

1、研究目的：
　　 觀察我國特有的3種蜘蛛（虎紋捕鳥蛛、敬釗纓毛蛛、海南捕鳥蛛）毒素體內(nèi)外抗弓形蟲效果，并初步探索抗弓形蟲的作用機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 1、毒理實(shí)驗(yàn)
　　 采用MTT法觀察虎紋捕鳥蛛毒素、敬釗纓毛蛛毒素和海南捕鳥蛛毒素對Hela細(xì)胞的毒性，計算出此三種蜘蛛毒素的半數(shù)毒性濃度(TC50)。
　　 2、體外實(shí)驗(yàn)
　　 (1)感染前處理以對倍稀釋法將蜘蛛毒素配成5種不同濃度

2、，加入到弓形蟲速殖子懸液內(nèi)孵育lh，感染培養(yǎng)細(xì)胞24h后，觀察蜘蛛毒素抑制弓形蟲速殖子侵入細(xì)胞和胞內(nèi)增殖的能力。
　　 (2)感染后處理弓形蟲速殖子接種細(xì)胞3h后，加入以對倍稀釋法配制的5種不同濃度的蜘蛛毒素，24h后觀察蜘蛛毒素抑制弓形蟲速殖子侵入細(xì)胞和胞內(nèi)增殖的能力。
　　 (3)時效觀察細(xì)胞貼壁后接種弓形蟲速殖子，同時加入相同劑量篩選出的蜘蛛毒素，觀察蜘蛛毒素不同處理時間抑制弓形蟲速殖子侵入宿主細(xì)胞的能力。

3、　　 3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
　　 弓形蟲速殖子腹腔接種法感染小鼠2h后，采用經(jīng)腹腔注射蜘蛛毒素，每天觀察小鼠的飲食、活動、發(fā)病情況及小鼠死亡時間和死亡數(shù)。
　　 研究結(jié)果：
　　 1、MTT法結(jié)果表明敬釗纓毛蛛毒素的細(xì)胞毒性最強(qiáng)，其半數(shù)細(xì)胞毒性濃度TC50為32.7μg/ml;其次是虎紋捕鳥蛛毒素，TC50為41.2μg/ml;而海南捕鳥蛛毒素的細(xì)胞毒性最弱，TC50為109μg/ml。
　　 2、當(dāng)敬釗纓毛蛛

4、毒素濃度為32.7μg/ml和4.1μg/ml時，感染前處理中弓形蟲的感染率分別是14.3％和25.7％；感染后處理中弓形蟲的感染率分別是11.9％和25.5％，均明顯低于對照組(P<0.05)；且兩種處理方式中，在濃度為32.7μg/ml時，納蟲泡內(nèi)蟲體均數(shù)低于對照組(P<0.05)；虎紋捕鳥蛛毒素濃度為41.2μg/ml和lO.3μg/ml時，感染前處理中弓形蟲的感染率分別是16.4％和23.9％；感染后處理中弓形蟲感染率分別是15

5、％和23.9％，均明顯低于對照組(PO．05)。
　　 3、蜘蛛毒素處理24h時，陰性對照組弓形蟲感染率為40.8％，敬釗纓毛蛛毒素組感染率為20.2％，虎紋捕鳥蛛毒素組感染率為20.5％；而蜘蛛毒素處理48h時，陰性對照組弓形蟲感染率為85％，敬釗纓毛蛛毒素組弓形蟲感染率為13％；虎紋捕鳥蛛毒素組感染率為36.3％。
　　 4、體