豚鼠小腦前下動(dòng)脈慢性栓塞模型及其相關(guān)因素的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、內(nèi)耳微循環(huán)保持相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)是維持其正常生理功能的基礎(chǔ)，而各種致病因子作用所導(dǎo)致的內(nèi)耳缺血性改變，則會(huì)破壞這種平衡狀態(tài)，引起病理生理改變，產(chǎn)生相應(yīng)的功能障礙。
　　本實(shí)驗(yàn)探討建立一種慢性?xún)?nèi)耳缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷男路椒ǎ?duì)其相關(guān)因素做初步研究。
　　1目的
　　探討如何建立慢性?xún)?nèi)耳缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ǎ宰罱咏谌梭w病理生理過(guò)程的方式，為臨床研究慢性缺血性?xún)?nèi)耳疾病提供合理、有效的動(dòng)物模型；并且通過(guò)研究模型動(dòng)物內(nèi)耳缺血期間電生理指

2、標(biāo)的改變，希望對(duì)該類(lèi)疾病早期診斷、監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估有所幫助；同時(shí)通過(guò)研究缺血期間耳蝸組織內(nèi)活性氧族含量改變的情況，進(jìn)一步明確耳蝸缺血所致聽(tīng)覺(jué)功能損傷的機(jī)理。
　　2方法
　　2.1手術(shù)選擇腹側(cè)進(jìn)路，頸前正中切口，鈍性分離豚鼠頸前組織，沿氣管旁間隙直達(dá)顱底，電鉆磨開(kāi)枕部顱底，仔細(xì)觀察豚鼠小腦前下動(dòng)脈（AICA）與基底動(dòng)脈（BA）的關(guān)系，尋找并正確辨認(rèn)AICA，分別使用40％和50％三氯化鐵（FeCl3）溶液作用于血管外壁誘導(dǎo)血

3、管內(nèi)血栓形成。
　　2.2隨機(jī)將豚鼠分為3組：正常組、手術(shù)組、血栓組。暴露AICA后，使用浸有40％FeCl3溶液的濾紙貼敷于血管外，作用形成血管內(nèi)血栓。術(shù)中監(jiān)測(cè)耳蝸血流（CoBF）變化，實(shí)驗(yàn)前后測(cè)量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的聽(tīng)性腦干反應(yīng)（ABR），血栓組豚鼠取AICA制做冰凍切片、蘇木素-伊紅（HE）染色觀察血栓形態(tài)。術(shù)后飼養(yǎng)模型動(dòng)物超過(guò)7天時(shí)間，以達(dá)到制作慢性?xún)?nèi)耳缺血模型的目的。
　　2.3隨機(jī)將豚鼠分為3組：正常組、手術(shù)組、血栓組。使

4、用同前述方法制作豚鼠AICA慢性栓塞模型，實(shí)驗(yàn)前后、實(shí)驗(yàn)后7天、實(shí)驗(yàn)后30天檢測(cè)畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（DPOAE），并檢測(cè)耳蝸組織超氧化物歧化酶（SOD）的含量，實(shí)驗(yàn)前后取豚鼠耳蝸基底膜鋪片、硝酸銀染色、光學(xué)顯微鏡觀察。
　　3結(jié)果
　　3.1解剖豚鼠AICA觀察，可見(jiàn)30只豚鼠中約有18只的AICA距枕骨大孔的距離大于等于2mm，9只豚鼠的AICA位置距枕骨大孔的位置小于2mm，3只豚鼠的AICA在實(shí)驗(yàn)所開(kāi)骨窗中未明確暴露；分

5、別使用40％和50％三氯化鐵溶液作用于AICA外壁，均可見(jiàn)其血流量減少、顏色發(fā)白，或是呈黑色，為明顯缺血樣改變。
　　3.2使用該方法模型動(dòng)物存活時(shí)間達(dá)7天以上，最長(zhǎng)可達(dá)30天，可以制作慢性?xún)?nèi)耳缺血的動(dòng)物模型，阻斷內(nèi)耳血流可靠，血栓形態(tài)近似于人體白色血栓；激光多普勒血流儀監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)血栓形成后，耳蝸底轉(zhuǎn)外側(cè)壁的血流明顯減少，大約降低至血栓形成前的50％；ABR的改變?cè)谘ㄐ纬珊?天內(nèi)有明顯的變化，4天以后基本恢復(fù)到術(shù)前的水平。

6、　　3.3在豚鼠AICA栓塞模型建立后，畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射檢測(cè)顯示，血栓組實(shí)驗(yàn)后7天內(nèi)都不能引出，實(shí)驗(yàn)后14天后可以引出，實(shí)驗(yàn)后30天后亦可引出DPOAE；血栓組耳蝸組織的SOD含量則呈明顯下降趨勢(shì)，在實(shí)驗(yàn)后7天有所恢復(fù)，實(shí)驗(yàn)后30天亦基本恢復(fù)到術(shù)前水平；基底膜鋪片可見(jiàn)血栓組實(shí)驗(yàn)后7天外毛細(xì)胞損傷較重，實(shí)驗(yàn)后30天亦不能恢復(fù)正常形態(tài)。
　　4結(jié)論
　　4.1解剖實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)豚鼠AICA的直徑一般不超過(guò)0.5mm，幾乎都由BA發(fā)

7、出，一般雙側(cè)對(duì)稱(chēng)，位置較不恒定，約60％的位置距枕骨大孔≥2mm，其余部分在2mm以?xún)?nèi)，個(gè)別在骨窗未見(jiàn)到AICA；使用40％以上濃度FeCl3溶液作用于血管外壁可成功誘導(dǎo)血管內(nèi)血栓。
　　4.2用40％FeCl3誘導(dǎo)豚鼠AICA栓塞的方法可以制作慢性?xún)?nèi)耳缺血的動(dòng)物模型，動(dòng)物存活7天以上，最長(zhǎng)可達(dá)30天，完全可以滿足慢性缺血模型的時(shí)間要求；實(shí)驗(yàn)中使用激光多普勒血流儀可以監(jiān)測(cè)到耳蝸血流的明顯下降，可以證明血栓的形成；血栓形成方式基本符

8、合人體血栓形成的過(guò)程，手術(shù)方式具有可操作性，易于掌握，能為臨床研究相關(guān)內(nèi)耳微循環(huán)障礙疾病提供較好的動(dòng)物模型。
　　4.3實(shí)驗(yàn)中ABR的恢變可能與血管的再通或是相應(yīng)側(cè)支循環(huán)的代償有關(guān)；DPOAE恢復(fù)則說(shuō)明耳蝸外毛細(xì)胞的缺血性損傷，是可以通過(guò)機(jī)體自身修復(fù)而達(dá)到最大限度的保留功能的目的；缺血后活性氧族的增多，消耗大量的SOD，故表現(xiàn)為SOD含量明顯下降，說(shuō)明活性氧族參與或加重內(nèi)耳缺血損傷，并致聽(tīng)覺(jué)功能障礙；耳蝸基底膜鋪片可見(jiàn)外毛細(xì)胞的纖